1.一种柚皮素抗原,其特征在于:结构通式如式A所示,
所述式A中,X为O、S、CH2、NH基团中的一种,n为0-6的整数;Protein表示载体蛋白,所述载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。
2.根据权利要求1所述的一种柚皮素抗原的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将柚皮素与式B所示同时含有氨基和羧基的化合物进行反应得到式C所示化合物;
H2N-X-(CH2)n-COOH
式B结构式
所述式B和式C中,X为O、S、CH2、NH基团中的一种,n为0-6的整数;
(2)式C所示化合物和N-羟基琥珀酰亚胺在二环己基碳二亚胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐存在的条件下进行偶联反应得到式D所示化合物;
所述式D中,X为O、S、CH2、NH基团中的一种,n为0-6的整数;
(3)式D所示化合物与载体蛋白经偶联反应即得式A所示柚皮素抗原;所述载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中,式B所示化合物选自羧甲氧基胺、肼基乙酸、氨基乙酸、氨基丙酸、氨基丁酸、氨基戊酸和氨基己酸中至少一种。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中,式B化合物和柚皮素的投料摩尔配比为(0.1-10):1;
所述反应的温度为0~100℃,时间为6~48小时;
所述反应的溶剂选自吡啶、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和四氢呋喃中至少一种。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,式C所示化合物、N-羟基琥珀酰亚胺与二环己基碳二亚胺的摩尔份数比为1:(1~5):(1~5);
式C所示化合物、N-羟基琥珀酰亚胺与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔份数比为1:(1~5):(1~5);
所述偶联反应的温度为0~50℃,时间为4~24小时。
6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中,式D所示化合物与所述载体蛋白的摩尔份数比为(5~100):1;
所述偶联反应的温度为0~50℃,时间为8~36小时;所述偶联反应在pH值为4~11的条件下进行;
式D所示化合物在所述载体蛋白的溶液中进行偶联反应,所述载体蛋白的溶液是由所述载体蛋白加入至缓冲溶液中得到的,所述缓冲溶液选自碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中至少一种,所述缓冲液的pH值均为7.4。
7.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述方法还包括将偶联反应的反应体系进行透析的步骤;所述透析步骤中,所用透析液为pH值4~10、浓度0.01~0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液。
8.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述柚皮素抗原是柚皮素与载体蛋白通过酰胺键连接形成的偶联物;所述酰胺键是式C上的羧基通过活泼酯与载体蛋白上的氨基形成的。
9.一种根据权利要求1-8所述柚皮素抗原的应用,其特征在于,该应用包括:在检测样品中柚皮素的应用,在制备用于检测样品中柚皮素的酶联免疫试剂盒中的应用,在制备柚皮素的发光免疫试剂盒或免疫亲和色谱柱中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用方法,其特征在于:所述检测样品为水体、药品、食品或土壤。