1.一种柚皮素抗原的制备方法,包括如下步骤:(1)将柚皮素与式B所示同时含有氨基和羧基的化合物进行反应得到式C所示化合物;
式B结构式
式C结构式
式B和式C中,X为O、S、CH2、NH基团中的一种,n为1‑6的整数;
(2)式C所示化合物和N‑羟基琥珀酰亚胺在二环己基碳二亚胺或1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐存在的条件下进行偶联反应得到式D所示化合物;
式D结构式
式D中,X为O、S、CH2、NH基团中的一种,n为1‑6的整数;
(3)式D所示化合物与载体蛋白经偶联反应即得式A所示柚皮素抗原;载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种;
式A结构式
式A中,X为O、S、CH2、NH基团中的一种,n为1‑6的整数;Protein表示载体蛋白;
其中:
所述柚皮素抗原是柚皮素与载体蛋白通过酰胺键连接形成的偶联物;
酰胺键是式C上的羧基通过活泼酯与载体蛋白上的氨基形成的。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中,式B所示化合物选自羧甲氧基胺、肼基乙酸、氨基乙酸、氨基丙酸、氨基丁酸、氨基戊酸和氨基己酸中至少一种。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中,式B化合物和柚皮素的投料摩尔配比为(0.1‑10):1;
所述反应的温度为0 100℃,时间为6 48小时;
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所述反应的溶剂选自吡啶、N,N‑二甲基甲酰胺、二甲亚砜和四氢呋喃中至少一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,式C所示化合物、N‑羟基琥珀酰亚胺与二环己基碳二亚胺的摩尔份数比为1:(1 5):(1 5);
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式C所示化合物、N‑羟基琥珀酰亚胺与1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔份数比为1:(1 5):(1 5);
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所述偶联反应的温度为0 50℃,时间为4 24小时。
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5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中,式D所示化合物与所述载体蛋白的摩尔份数比为(5 100):1;
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所述偶联反应在温度0 50℃、pH值4 11的条件下反应8 36小时;
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式D所示化合物在所述载体蛋白的溶液中进行偶联反应;
所述载体蛋白的溶液是由所述载体蛋白加入至缓冲溶液中得到的;
所述缓冲溶液选自碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和4‑羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中至少一种;
所述缓冲液的pH值均为7.4。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述方法还包括将偶联反应的反应体系进行透析的步骤;
所用透析液为pH值4 10、浓度0.01 0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液。
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7.一种根据权利要求1‑6任一项所述制备方法制得的柚皮素抗原。
8.一种根据权利要求7所述柚皮素抗原的应用,其特征在于:该应用包括:在检测样品中柚皮素的应用,在制备用于检测样品中柚皮素的酶联免疫试剂盒中的应用,在制备柚皮素的发光免疫试剂盒或免疫亲和色谱柱中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于:所述检测样品为水体、药品、食品或土壤。