1.基于杂交链反应及TdT调控双重信号放大的铅离子交流阻抗传感器研究，其特征在于，机理如下：设计了三种DNA探针，包括一个含有巯基并可引发HCR反应的辅助探针HP，以及可以产生HCR放大反应的发夹1(H1)和发夹2(H2)探针。HCR反应后，在dNTP(dATP∶dGTP＝4∶6)存在下，通过脱氧核苷酸末端转移酶的特异性催化，使dNTP不断叠加到H1和H2链的3’-OH末端，生成随机排布富G的长链DNA。在Pb2+作用下，这种富G的DNA链会从无规则的卷曲结构变成规则的G4结构。G4与血红素(hemin)作用能够形成一种有辣根过氧化物酶活性的DNA模拟酶。在G4/hemin的生物催化作用下，3，3-二氨基联苯胺(DAB)被氧化形成不导电的IP，使得电极界面和氧化还原探针之间的电子转移受到很大阻碍，导致电化学阻抗信号的显着放大。

2.基于杂交链反应及TdT调控双重信号放大的铅离子交流阻抗传感器研究，具体步骤如下：

(1)Au：首先在含有粒径为0.05μm的Al2O3悬浮液的抛光布上抛光，然后在水中超声1～

6min处理，再用蒸馏水缓缓冲洗三次，获得干净的金电极(Au)。

(2)HCR/Au：a.Au用氮气吹干后置于HP(1～6μL，0.01～0.6μM)溶液中组装3～12h，蒸馏水缓缓冲洗；接着把电极浸泡在巯基己醇(MCH)(0.5～5mM)水溶液中10～30min，蒸馏水缓缓冲洗；b.将0.2～3μL 10×Tris反应缓冲液、发夹探针H1(0.1～2.5μL，0.02～1μM)、发夹探针H2(0.1～2.5μL，0.02～1μM)混合均匀并滴到a中电极表面，在25～39℃下反应0.5～

1.2h，蒸馏水缓缓冲洗，标记为HCR/Au。

(3)G4/HCR/Au：a.控制TdT反应液总体积为2.5μL：加入TdT缓冲液，dATP(0.2～0.8μL，

0.5～10mM)，dGTP(0.1～1.3μL，0.8～12mM)，TdT(0.2～1.5μL，0.5～12U/mL)，混合均匀，滴于HCR/Au表面，在25～39℃下放置0.3～1.3h，蒸馏水缓缓冲洗电极；b.再滴加Pb2+(0.6～6μL，0～5000nM)和hemin(0.8～8μL，0.5～2μM)，室温下静置15～50min，蒸馏水缓缓冲洗。

(4)IP/G4/HCR/Au：滴加DAB(2～10μL，1～20mM)和H2O2(2～10μL，1～20mM)，静置10～

60min，标记为IP/G4/HCR/Au，用于EIS检测。

3.根据权利要求1～2所述的电化学生物传感器的制备，其特征在于第一次利用杂交链反应和TdT扩增反应双重信号放大构建铅离子电化学交流阻抗传感器。

4.根据权利要求1～3所述的电化学交流阻抗传感器的制备，可以实现不同浓度Pb2+的检测，检测限低至0.03pM，具有较好的选择性和抗干扰性。