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专利号: 2019110105445
申请人: 宁波大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种基于DNA无模板扩增和“金属离子‑谷胱甘肽”开关的电化学逻辑运算方法,具体步骤如下:(1)金电极Au:金电极使用前用直径为0.3μm的Al2O3粉末进行打磨,利用超纯水通过超声清洗3次,之后置于氮气流中干燥,再将其浸泡于0.1~1.5M的H2SO4溶液中,在‑0.4V~+

1.3V范围内进行循环伏安扫描3~30min,最后再经超纯水清洗后氮气吹干备用;

(2)Electrode 1:取3~9μL浓度为0.1~1.3μM巯基DNA溶液滴涂于Au表面,在4℃冰箱孵育过夜,用蒸馏水缓缓冲洗电极,采用0.5~1.6mM巯基己醇MCH处理20~50min,蒸馏水缓缓冲洗;

其中巯基DNA序列为:5’‑SH‑ACGTAG‑3’;

(3)Electrode 2:将0.2~2.8μL蒸馏水,0.4~2.1μL TdT缓冲液,dNTP,0.3~4μL浓度为2~2000U/mL的TdT,混合均匀,滴于Electrode 1表面,在20~40℃下放置0.5~2h后,用蒸馏水缓缓冲洗电极;

其中所述dNTP组成如下:0.2~1.1μL dTTP,0.3~1.8μL dGTP,3~10mM;

(4)Electrode 3:向电极Electrode 2上滴加2~5μL浓度为1~20μM的hemin,室温放置

0.4~1h;

逻辑门“金属离子‑谷胱甘肽GSH”开关实验步骤:将Electrode 3置于PBS溶液中用循环伏安法扫描该电极对该溶液的响应,随后将电极取出置于1mM金属离子溶液当中孵育

30min,置于PBS溶液中用循环伏安法扫描该电极对该溶液的响应;再将电极取出置于1mM谷胱甘肽GSH溶液当中孵育30min,置于PBS溶液中用循环伏安法扫描该电极对该溶液的响应;

+ 2+

其中所述金属离子为Ag或Hg ;所述PBS溶液含2mM TMB,2mM H2O2。

2.根据权利要求1所述的电化学逻辑运算方法的应用,其特征在于,应用于NOT逻辑门+ +的构建,具体如下:对于“输入”,“1”表示Ag加入,“0”表示Ag未加入;对于“输出”“1”表示信

2+ +

号产生,“0”表示信号未产生,Hg 同Ag设计。

3.根据权利要求1所述的电化学逻辑运算方法的应用,其特征在于,应用于IMPLY逻辑+ +门的构建,具体如下:对于“输入”,“1”表示Ag或GSH加入,“0”表示Ag或GSH未加入;对于“输

2+ +

出”“1”表示信号产生,“0”表示信号未产生,Hg ‑GSH同Ag‑GSH设计。

4.根据权利要求1所述的电化学逻辑运算方法的应用,其特征在于,应用于NOR逻辑门+ 2+ + 2+的构建,具体如下:对于“输入”,“1”表示Ag 或Hg 加入,“0”表示Ag或Hg 未加入;对于“输出”“1”表示信号产生,“0”表示信号未产生。