1.一种化橘红愈伤组织诱导出芽的方法,它包括以下步骤:外植体选取以及灭菌、愈伤组织形成、继代培养、诱导愈伤组织出芽和芽形成后的生根诱导、炼苗和移栽;
其中愈伤组织形成步骤采用愈伤组织形成培养基;
愈伤组织形成培养基的配制:MS+苄基腺嘌呤(6-BA)0.8-1.2mg/L+萘乙酸(NAA)0.03-
0.06mg/L+维生素C100~120mg/L+蔗糖50g/L+土豆100g/L+琼脂7g/L,培养基pH值为5.8;
其中诱导愈伤组织出芽步骤采用诱导培养基;
诱导培养基的配制:MS+苄基腺嘌呤(6-BA)0.8-1.2mg/L+萘乙酸(NAA)0.03-0.06mg/L+维生素C 100~120mg/L+乙酰丁香酮0.196mg/L+海藻糖15g/L+化橘红叶提取液0.2mg/L+土豆100g/L+琼脂7g/L,培养基pH值为5.8;
其中化橘红提取液制备方法:
取新鲜化橘红叶置110℃烘箱中杀青,再置60℃中烘至恒重,经粉碎和过40目筛得到小于40目的粉末作提取用;分别取5g叶样品粉末,置于250mL提取管中,加入60%乙醇溶液
250mL,充分摇匀,采用超声仪在40~50℃超声20~30min,提取2次;合并所有提取液并冷冻干燥,用超纯水进行溶解并置4℃备用。
2.根据权利要求1所述的一种化橘红愈伤组织诱导出芽的方法,其特征在于:所述愈伤组织形成步骤中,在温度为26±2℃的条件下暗培养15~20天。
3.根据权利要求1所述的一种化橘红愈伤组织诱导出芽的方法,其特征在于:所述诱导愈伤组织出芽步骤中,在光照强度为2300-24001x,16h/8h光暗条件下,温度为26±2℃的条件下培养25~35天。
4.根据权利要求1所述的一种化橘红愈伤组织诱导出芽的方法,其特征在于:所述外植体采用化橘红当年生半木质化茎段。
5.根据权利要求1所述的一种化橘红愈伤组织诱导出芽的方法,其特征在于:所述化橘红当年生半木质化茎段用灭菌手术刀斜切1.5-2.0cm的腋芽作为外植体。
6.根据权利要求1所述的一种化橘红愈伤组织诱导出芽的方法,其特征在于:所述愈伤组织形成培养基的配制流程为:将MS+苄基腺嘌呤(6-BA)0.8-1.2mg/L+萘乙酸(NAA)0.03-
0.06mg/L+维生素C100~120mg/L+蔗糖50g/L+土豆100g/L+琼脂7g/L配制成工作液,将工作液按照每个锥形瓶50mL分装,分装后通过吸尘器对每个锥形瓶进行抽气,然后将锥形瓶密封并放入消毒锅高压消毒。