1.一种火焰树愈伤组织的诱导方法,包括如下步骤:
1)取火焰树花瓣在洗衣粉溶液浸泡后流水冲洗,然后转置超净工作台依次用酒精、升汞、次氯酸钠灭菌处理,其中用70-80%酒精浸泡25-35s,转至0.1~0.2%HgCl25~12min后,无菌水漂洗3-5次,再用1%NaClO浸泡1~8min后,无菌水漂洗2-4次;每次无菌水漂洗时间为1-3min;无菌蒸馏水洗净后获得消毒的火焰树外植体;
2)愈伤组织诱导培养:取步骤1)已消毒的外植体切成0.4-0.6cm*0.4-0.6cm大小接种于诱导培养基中,培养条件为:光照强度1200-2000LuX,光照时间8-12h/d,温度25±2℃,pH=5.8,所述诱导培养基,按每升计算,含有400mg NH4NO3、556mg Ca(NO3)2·4H2O、990mg K2SO4、96mg CaCl2·2H2O、170mg KH2PO4、0.25mg Na2MoO4·2H2O、
370mg MgSO4·7H2O、22.4mg MnSO4·H2O、8.6mg ZnSO4·7H2O、0.25mg CuSO4·5H2O、27.8mg FeSO4·7H2O、37.3mg Na2MoEDTA、100mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5mg烟酸、0.5mg维生素B6、
2.0mg甘氨酸、20-30g蔗糖、7-9g琼脂,诱导培养基中添加0.1~2.0mg2,4-D、0.1~2.0mg NAA、0.2mg VC;
3)愈伤组织增殖培养:取步骤2)所得的初代愈伤组织转接于继代培养基中,培养条件为温度25±2℃,pH=5.8,先暗培养7d,然后正常光培养,光照强度1200-2000LuX,光照时间8-12h/d,所述增殖培养基,按每升计算,含有200mg NH4NO3、668mg Ca(NO3)2·4H2O、
990mg K2SO4、170mg KH2PO4、0.25mg Na2MoO4·2H2O、370mgMgSO4·7H2O、22.4mg MnSO4·H2O、
8.6mg ZnSO4·7H2O、0.25mg CuSO4·5H2O、27.8mg FeSO4·7H2O、37.3mg Na2MoEDTA、100mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5mg烟酸、0.5mg维生素B6、2.0mg甘氨酸、100mg水解酪蛋白、20-30g蔗糖、7-9g琼脂;增殖培养基中添加1.0mg2,4-D、0.5~1.0mg NAA、0~0.2mgVC。
2.如权利要求1所述的一种火焰树愈伤组织诱导的方法,其特征在于:步骤1)火焰树花瓣为火焰树长势饱满未开放花瓣。
3.如权利要求1所述的一种火焰树愈伤组织的诱导方法,其特征在于:步骤1)中,外植体经洗衣粉溶液浸泡15min,再流水冲洗2h,后经75%酒精浸泡30s,转至0.1%HgCl2 浸泡8min后,无菌水漂洗4次,再用1%NaClO浸泡8min后,无菌水漂洗3次;每次无菌水漂洗时间为2min。
4.如权利要求1所述的一种火焰树愈伤组织的诱导方法,其特征在于:步骤2)的外植体大小为0.5cm*0.5cm。
5.如权利要求1所述的一种火焰树愈伤组织的诱导方法,其特征在于:步骤2)诱导培养基添加1.0mg/L 2,4-D、1.0mg/L NAA、0.2mg/LVC。
6.如权利要求1所述的一种火焰树愈伤组织的诱导方法,其特征在于:步骤3)增殖培养基添加1.0mg2,4-D、1.0mg NAA、0.2mg VC。