1.一种同时检测发酵食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、苯乳酸、苯丙氨酸的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
1)制备混合标准溶液:分别称取苯甲酸、山梨酸、糖精钠、苯乳酸、苯丙氨酸的标准品,配制成具有浓度梯度的混合标准液;
2)制备待测样品溶液:
称取2.5g样品于25mL比色管中,分别加入0.25mol/L亚铁氰化钾溶液和0.5mol/L乙酸锌溶液各1mL,用10%甲醇水溶液定容至25ml,震荡2min,混匀,所述溶液于4000rpm离心
5min,取上层清液过0.22μm聚醚砜滤膜得滤液备用;
3)检测仪器及检测条件:
仪器:高效液相色谱仪;检测器:UV检测器;色谱柱:C18柱,流动相:0.02mol/L乙酸铵和甲醇按体积比80:20混合而成;流速:1mL/min;进样量:20μL;检测波长:220nm;色谱柱温度:
25℃;保留时间:苯丙氨酸,6.631min;苯甲酸,7.495min;糖精钠,7.997min;山梨酸,
9.574min;苯乳酸,11.138min;
4)绘制标准曲线:
将步骤1)配制的系列混合标准溶液注入高效液相色谱仪中,在步骤(3)的色谱条件下进行洗脱和检测,以保留时间定性,根据各浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线,并评估标准曲线线性度;
5)待测样品检测:
取步骤2)中待测样品溶液注入高效液相色谱仪中,在步骤3)的色谱条件下进行检测,测得滤液中各目标物的峰面积,以保留时间定性,根据4)中制作的标准曲线定量,计算出待测样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、苯乳酸、苯丙氨酸的含量;
调节步骤3)所述流动相中0.02mol/L乙酸铵的pH为6.44,所述甲醇为含量大于99.8%的色谱纯,后续色谱柱箱温度为25℃,流速为1.0mL/min。
2.根据权利要求1所述一种同时检测发酵食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、苯乳酸、苯丙氨酸的方法,其特征在于,步骤1)所述混合标准溶液所用稀释溶剂为蒸馏水。
3.根据权利要求1所述一种同时检测发酵食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、苯乳酸、苯丙氨酸的方法,其特征在于,步骤1)所述混合标准溶液中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、苯乳酸、苯丙氨酸分别呈2mg/L,5mg/L,10mg/L,20mg/L,30mg/L,40mg/L,50mg/L的梯度系列。
4.根据权利要求1所述一种同时检测发酵食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、苯乳酸、苯丙氨酸的方法,其特征在于,步骤3)C18色谱柱的规格为250mm×4.6mm内径,颗粒粒径为5μm。
5.根据权利要求1所述一种同时检测发酵食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、苯乳酸、苯丙氨酸的方法,其特征在于,通过以下方法验证所述方法检测准确度、精密度及回收率:将混合标准溶液不断稀释至信噪比S/N=3,以此进样浓度为检出限(LOD),以10倍信噪比对应的浓度为定量下限(LOQ);以原生醋做加标回收实验,通过计算回收率考察方法的准确度,以回收率的相对标准偏差(RSD)考察方法的精密度,在原生醋样品中添加混合标准溶液,加标水平分别为5,10,20mg/L,每个添加水平平行测定6次,并用下面的公式计算加标回收率;
其中,Csm表示加标检测值;Cm表示样品检测值;Cs表示加标浓度。