利索能及
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专利号: 2019107456910
申请人: 黄河科技学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-11-19
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用马德里毛壳菌制备细胞松弛素类化合物的方法,其特征在于,所述细胞松弛素类化合物结构式如下:;

所述细胞松弛素类化合物用于制备抗肿瘤药剂,所述肿瘤为人肝癌细胞HepG2;

所述方法包括以下步骤:

(1)菌种活化:将马德里毛壳菌接种到SDAY平板培养基上,25 30℃下培养5d 7d,得到~ ~活化菌种;

(2)发酵培养:将步骤(1)中得到的活化菌种接种到大米固体培养基中,25 30℃静置培~养24 28d,得发酵物;

~

(3)乙酸乙酯浸提:将步骤(2)得到的发酵物用乙酸乙酯浸提,浸提液浓缩得粗提物浸膏;

(4)粗提物柱层析分离:将步骤(3)得到的粗提物浸膏以二氯甲烷:甲醇体积比分别为

100:1、50:1、10:1、1:1进行梯度洗脱,经薄层层析检测,得到6个流份,并编号为Fr.1 - Fr.6,再利用硅胶柱层析法或葡聚糖凝胶柱层析分离得到粗产物,并利用半制备反相高效液相法进行纯化,得到所述细胞松弛素类化合物;

所述马德里毛壳菌保藏的分类学名称为马德里毛壳菌Chaetomium madrasense CLC375,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址:中国.武汉.武汉大学;保藏日期:2019年7月3日,保藏号为:CCTCC M 2019517;

步骤(3)中所述乙酸乙酯浸提的过程如下:将步骤(2)得到的发酵物中加入300mL乙酸乙酯,搅拌,放置12 16h后过滤,重复以上浸提方法三次后,合并三次的浸提液,将浸提液减~压浓缩得粗提物浸膏;

步骤(4)中Fr. 6使用ODS反相硅胶柱层析,得到5个组分Fr. 6.1 - Fr. 6.5;将得到的流份Fr.6.2使用葡聚糖凝胶柱层析,以甲醇为溶剂进行洗脱得到产物,最后再使用半制备反相高效液相法进行纯化,得到化合物2;

所述化合物2半制备反相高效液相纯化方法为:选用YMC为色谱柱,色谱柱规格为10 mm × 250 mm,5 μm;流动相为乙腈和水,乙腈与水的体积比为30:70;流速为2mL/min;检测波长为220, 254;保留时间为 30.7 min。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中所述大米培养基的制备:取50-

70g大米,100m L水,在121℃高压灭菌25-30min。