1.一种能够水解纤维素、果胶或半纤维素的蛋白酶组合物,其特征在于:制备步骤如下:
⑴将扩展青霉、意大利青霉、指状青霉、灰葡萄孢菌、黑曲霉、米曲霉、稻瘟菌、禾谷镰刀菌、尖孢镰孢菌、白粉病菌、壳针孢叶枯菌、炭疽病菌和酵母菌以单一或者组合的方式接种到添加25%(w/w)苹果渣复合培养基中,于4-45℃条件下进行培养0至120小时;
其中,所述25%(w/w)苹果渣复合培养基的制备方法为:称取苹果榨汁后的加工副产物苹果渣加入水、植物细胞壁组分多糖和无机氮源,苹果榨汁后的加工副产物苹果渣:水:植物细胞壁组分多糖:无机氮源的质量比为1:3:0-0.1:0-0.1,置于90-121℃下灭菌20分钟待用;
⑵将发酵液离心,收集上清,再用质量浓度10%-90%的饱和硫酸铵进行盐析,低温-10℃-+10℃放置过夜后于低温离心,即4℃和4000-9000g条件下离心30分钟,弃去上清,用pH=6.5的磷酸缓冲液溶解沉淀得到蛋白;
⑶最后,将该蛋白置于pH=6.5的磷酸缓冲液中并使用3500Da纤维素透析袋透析24小时,期间换液3次,即得到能够水解纤维素、果胶或半纤维素的蛋白酶组合物;
或者,将离心后的上清溶液打入喷雾干燥塔喷粉,塔内温度180℃,出风温度85℃,在塔底得到蛋白酶组合物。
2.如权利要求1所述的能够水解纤维素、果胶或半纤维素的蛋白酶组合物在直接用于增强果实系统抗病能力,防止果实被坏死性真菌感染方面中的应用。
3.如权利要求1所述的能够水解纤维素、果胶或半纤维素的蛋白酶组合物在用于处理食品加工废弃物,使处理后的废弃物中含有高活性果实机械损伤愈合促进因子方面中的应用。
4.根据权利要求3所述的能够水解纤维素、果胶或半纤维素的蛋白酶组合物在用于处理食品加工废弃物,使处理后的废弃物中含有高活性果实机械损伤愈合促进因子方面中的应用,其特征在于:所述食品加工废弃物为苹果渣、柚子皮渣、柠檬皮渣或柑橘皮渣。
5.一种利用如权利要求1所述的能够水解纤维素、果胶或半纤维素的蛋白酶组合物制备抑制果实软化和减轻机械损伤危害的寡糖保鲜剂,其特征在于:制备步骤如下:用能够水解纤维素、果胶或半纤维素的蛋白酶组合物,于10-50℃条件下水解高果胶、纤维素和半纤维素含量苹果渣,该苹果渣的质量浓度为0.5%-10%w/v,蛋白酶组合物:苹果渣的体积比为1:0.1-10,然后加入1-5倍体积的95%乙醇,于4℃条件下放置过夜,4℃条件下4000-9000g离心20分钟,收集上清液;
将上清液于60℃,20r/min条件下蒸馏旋转直至旋干或者真空冷冻浓缩,最后用去离子水溶解沉淀,得到目标保鲜剂,且产物的质量浓度不低于4%。
6.根据权利要求5所述的抑制果实软化和减轻机械损伤危害的寡糖保鲜剂,其特征在于:所述高果胶、纤维素和半纤维素含量苹果渣的制备方法为:①将苹果渣迅速加热至60-100℃后,保持15分钟;
②用4%(w/v)的NaOH50%(v/v)乙醇混合溶液漂洗苹果渣2~6小时,取滤渣;
③加入10-50%乙醇三氟乙酸溶液,其pH=1.5,室温下搅拌30分钟,抽滤后用温水继续漂洗苹果渣至水为无色或中性为止;
④滤渣用流化床干燥机干燥至恒重,粉碎,即得高果胶、纤维素和半纤维素含量苹果渣。
7.如权利要求5所述的抑制果实软化和减轻机械损伤危害的寡糖保鲜剂在抑制采后易软化果实硬度的变化、减缓可溶性固形物生成方面中的应用。
8.如权利要求5所述的抑制果实软化和减轻机械损伤危害的寡糖保鲜剂在促进果实机械损伤愈合、减轻果实机械损伤次生危害方面中的应用。
9.根据权利要求8所述的抑制果实软化和减轻机械损伤危害的寡糖保鲜剂在促进果实机械损伤愈合、减轻机械损伤次生危害方面中的应用,其特征在于:所述保鲜剂于番茄果实中施用后可以有效缩短番茄果实机械损伤伤口的愈合时间至12小时以内,以病原菌侵染成功率低于10%为伤口有效愈合的表征。
10.根据权利要求8或9所述的抑制果实软化和减轻机械损伤危害的寡糖保鲜剂在促进果实机械损伤愈合、减轻机械损伤次生危害方面中的应用,其特征在于:所述保鲜剂于番茄果实中施用后的下游作用靶标为果胶酶编码基因SlPG或扩展蛋白编码基因SlEXP。