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专利号: 2019107002208
申请人: 湖南杂交水稻研究中心
专利类型:发明专利
专利状态:无效专利
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用水稻RAmy1A基因防止转基因花粉漂移的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、将水稻花粉特异性启动子和水稻RAmy1A基因连接至表达载体的目标T-DNA区得到pSB130-PNOP-RAmy1A载体;

所述水稻RAmy1A基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示;

所述花粉特异性启动子为PNOP启动子,所述PNOP启动子的DNA序列如SEQ ID NO.2所示;

S2、将所述pSB130-PNOP-RAmy1A载体导入水稻愈伤组织中获得花粉败育的水稻植株。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述S1具体为:

S1-1、根据水稻RAmy1A基因设计引物对,以水稻DNA为模版,进行PCR扩增得到扩增产物

1,将所述扩增产物1连接至表达载体中得到pSB130-RAmy1A载体;

S1-2、根据PNOP启动子序列设计引物对,以水稻DNA为模版,进行PCR扩增得到扩增产物

2;将所述扩增产物2连接至所述pSB130-RAmy1A载体中得到pSB130-PNOP-RAmy1A载体。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,根据水稻RAmy1A基因设计引物对包括RAmy1A-F和RAmy1A-R;所述RAmy1A-F的DNA序列如SEQ ID NO.3所示;所述RAmy1A-R的DNA序列如SEQ ID NO.4所示。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,根据PNOP启动子序列设计引物对包括PNOP-F和PNOP-R;所述PNOP-F的DNA序列如SEQ ID NO.5所示;所述PNOP-R的DNA序列如SEQ ID NO.6所示。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述S1-1中所述表达载体为pSB130。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法还包括:S3、将PTC1基因和红色荧光蛋白DsRed基因连接至所述pSB130-PNOP-RAmy1A载体中得到pSB130-PNOP-RAmy1A-PTC1-DsRed载体;

S4、将所述pSB130-PNOP-RAmy1A-PTC1-DsRed载体导入PTC1基因发生突变的水稻普通核不育系的幼穗愈伤组织中,筛选花粉一半可育一半不育的植株作为ptc1普通核不育系的繁殖系;

S5、将所述ptc1普通核不育系的繁殖系自交,其中发荧光的种子含有转基因元件,为繁殖系种子,可继续用于繁殖ptc1普通核不育系;而不发荧光的种子则不含转基因元件,为ptc1普通核不育系种子。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述S3具体为:

S3-1、根据PTC1基因设计引物对,进行PCR扩增获得PTC1基因,将所述PTC1基因连接至pSB130-PNOP-RAmy1A载体中获得pSB130-PNOP-RAmy1A-PTC1载体;

S3-2、根据DsRed基因设计引物对;进行PCR扩增获得DsRed基因,将所述DsRed基因连接至pSB130-PNOP-RAmy1A-PTC1载体中获得pSB130-PNOP-RAmy1A-PTC1-DsRed载体。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述S3-1中所述根据PTC1基因设计引物对包括PTC1-F和PTC1-R,所述PTC1-F的DNA序列如SEQ ID NO.11所示;所述PTC1-R的DNA序列如SEQ ID NO.12所示。

9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述S3-1中所述根据DsRed基因设计引物对包括DsRed-F和DsRed-R,所述DsRed-F的DNA序列如SEQ ID NO.13所示;所述DsRed-R的DNA序列如SEQ ID NO.14示。