1.一种基于CRISPRCas9介导CsWRKY22定点编辑提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,利用CRISPR/Cas9技术定点突变柑橘感病基因CsWRKY22,使其蛋白功能丧失或减少,增强植株对柑橘溃疡病的抗性;
G c
所述柑橘感病基因CsWRKY22为CsWRKY22和CsWRKY22等位基因,含有两个内含子和三G c个外显子,CsWRKY22具有如SEQ ID No:1所示核苷酸序列,CsWRKY22具有如SEQ ID No:2所示核苷酸序列;
用于编辑柑橘感病基因CsWRKY22的植物表达载体为含有特异靶向CsWRKY22基因sgRNA引导序列的CRISPR/Cas9载体;
用于特异指导Cas9编辑CsWRKY22基因的sgRNA序列为S1、S2、S3和S4,S1、S2、S3和S4分别具有如SEQ ID No:3、SEQ ID No:4、SEQ ID No:5和SEQ ID No:6所示核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的一种基于CRISPRCas9介导CsWRKY22定点编辑提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,用于创制突变体的转化方法为农杆菌介导的柑橘遗传转化方法,具体为:将CsWRKY22基因sgRNA引导序列的CRISPR/Cas9载体导入柑橘中,实现CsWRKY22基因定点突变,并获得抗性显著提高的突变体植株。
3.根据权利要求2所述的一种基于CRISPRCas9介导CsWRKY22定点编辑提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,所述突变体植株包括CsWRKY22序列突变的转基因植株和材料。
4.根据权利要求1所述的一种基于CRISPRCas9介导CsWRKY22定点编辑提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,所述柑橘感病基因CsWRKY22提取所采用的引物为WRKY22‑f和WRKY22‑r,分别具有如SEQ ID No:7和SEQ ID No:8所示核苷酸序列。