1.一种延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的方法,其特征在于,所述方法首先构建敲除家蚕核型多角体病毒gp64基因,在此基础上回复缺失了N端18个氨基酸的gp64基因,转染和感染家蚕细胞,收获病毒,注射家蚕幼虫,调查半数致死时间,能显著延长幼虫的死亡时间。
2.根据权利要求1所述的延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的方法,其特征在于,所述在此基础上回复缺失了N端18个氨基酸的gp64基因为将gp64基因截短18个氨基酸,所述18个氨基酸其序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的方法,其特征在于,所述18个氨基酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.一种用于延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的重组杆状病毒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)构建敲除gp64基因的重组Bacmid
以BmNPV的Bac-to-Bac系统BmBacJS13为基础,构建敲除gp64基因的重组Bacmid-BmBacΔgp64;
(2)在Bacmid-BmBacΔgp64的基础上构建回复截短了N端18个氨基酸的gp64基因(gp64M)的重组Bacmids;
根据BmNPV基因组中gp64序列设计引物,PCR扩增gp64M片段,插入pFast-egfp载体,筛选重组转移载体pFast-egfp-gp64M;
将转移载体pFast-egfp-gp64M转化含有Bacmid-BmBacΔgp64和辅助质粒(表达转座酶)的DH10B感受态细胞中;然后筛选重组Bacmid,重组Bacmid经PCR进一步鉴定,命名为BmBacΔgp64-gp64M;
(3)制备重组病毒
提取鉴定正确的重组Bacmid-BmBacΔgp64-gp64M DNA,转染BmN细胞,转染后收集上清,继续感染健康BmN细胞,大量扩增病毒,重组病毒命名为BmBacΔgp64-gp64M,测定滴度,
4℃避光保存备用。
5.根据权利要求4所述的用于延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的重组杆状病毒的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述pFast-egfp载体优选由pEGFP-N1质粒上XhoI和XbaI(补平)酶切egfp基因,克隆入经XhoI和KpnI(补平)酶切的pFastBacDUAL,构建质粒pFast-egfp载体。
6.根据权利要求4所述的用于延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的重组杆状病毒的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述引物为SEQ ID NO.3:GP64M-F:GGCAGGCCTATGGTAGGCGCTATTGTTTTATSEQ ID NO.4:GP64M-R:GCGCTGCAGTTAATATTGTCTACTATTACGGTTTC。
7.一种权利要求4所述的用于延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的重组杆状病毒的制备方法所制备的重组杆状病毒。
8.一种用于延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的重组杆状病毒在延迟感染家蚕幼虫的死亡时间,不影响病毒的增值中的应用。
9.一种用于延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的重组杆状病毒在虫体内制备外源蛋白中的应用。