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专利号: 2019105158512
申请人: 湖南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种同源四倍体鲤品系的建立方法,其特征在于,包括如下步骤:以鲤鱼为原始母本,团头鲂为原始父本进行杂交,杂交F1代中挑选出雌性异源四倍体鲤鲂与雄性同源二倍体类鲫,进行专池饲养;在繁殖季节,挑选2龄及2龄以上的能产生墨绿色卵子的异源四倍体鲤鲂雌性个体,以及1龄及1龄以上的能产生乳白色精液的同源二倍体类鲫雄性个体,进行人工催产,人工干法授精,授精完成后的受精卵在恒温、通气、流水的环境下孵化;待鱼苗孵化完成后进行专池饲养,再对饲养后的鱼苗进行检测筛选,得到染色体数目为200的同源四倍体鲤F1;将得到的雌、雄同源四倍体鲤F1自交,通过多代自交传代培养,得到遗传性状稳定的同源四倍体鲤品系。

2.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述雌性异源四倍体鲤鲂、雄性同源二倍体类鲫通过观察生物学特征、检测血细胞DNA含量的方法挑选得到;所述雌性异源四倍体鲤鲂的生物学特征表现为体形侧扁、近似纺锤形、背部青灰色、腹部黄白色、尾鳍灰色,经流式细胞仪检测其血细胞DNA含量为148;所述雄性同源二倍体类鲫的生物学特征表现为体形侧扁、背部隆起高而宽、腹部圆、呈纺锤形、头短而小、背部灰绿色、腹部灰白色,经流式细胞仪检测其血细胞DNA含量为100。

3.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述人工催产的具体步骤如下:在3月

21日至4月30日,水温维持在19℃~24℃,先对父本亲鱼注射绒毛膜促性腺激素与黄体素释放激素类似物的混合催产剂进行催产,其中绒毛膜促性腺激素的用量为350IU/kg~450IU/kg,黄体素释放激素类似物的用量为8μg/kg~12μg/kg;3h~5h后再对母本亲鱼注射绒毛膜促性腺激素、黄体素释放激素类似物与地欧酮的混合催产剂进行催产,其中绒毛膜促性腺激素的用量为700IU/kg~900IU/kg,黄体素释放激素类似物的用量为16μg/kg~24μg/kg,地欧酮的用量为1.5mg/kg~2.5mg/kg;然后将母本亲鱼与父本亲鱼按1︰(2~3)的数量比放入同一产卵池中待产,视水情及时向池中冲水,在产卵前2h~3h停止往池中冲水,使母、父本亲鱼在静水中待产,直至开始顺利产卵和产精。

4.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述人工干法授精的具体步骤如下:

在所述人工催产9h~12h后,将能够顺利产卵的母本亲鱼擦干水分,挤出墨绿色卵子置于器皿中,然后将能够顺利产精的父本亲鱼擦干水分,挤出乳白色精液置于墨绿色卵子上面,用干燥羽毛将精、卵子搅拌均匀后铺在水缸中平摊开的棕片上使其受精,所述棕片离水面5~

10cm。

5.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述受精卵的密度控制在2~3粒/cm2,所述孵化的水温控制在21℃~22℃。

6.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述鱼苗孵化完成后进行专池饲养的具体步骤如下:将孵化完成后得到的鱼苗先在纯水中养殖3~5天,待鱼苗出现腰点后转入事先暴晒干燥随后蓄水曝气的水泥池中继续饲养,水泥池中引进池塘中的肥水,加入水生植物构建小型生态系统,饲养初期加入水蚤蚤种用于辅助开口饵料,1~2天后泼洒豆浆用于发酵生产微生物,泼洒次数为2~3次/天,待鱼苗体长3~5cm时,转入池塘中饲养。

7.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述检测筛选的方法包括流式细胞DNA含量测定法、肾组织染色体制备法、性腺组织石蜡切片法、红细胞特征比较法和精子扫描电子显微镜测定法中的任意一种或多种。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的建立方法,其特征在于,所述雌、雄同源四倍体鲤F1自交的具体步骤如下:将1龄及1龄以上的雌、雄同源四倍体鲤F1群体按1︰(2~4)的数量比放入同一产卵池中,进行同源四倍体鲤F1的人工催产,人工干法授精和流水孵化,得到的鱼苗进行饲养,直至鱼苗长到8~10cm长后获得下一代同源四倍体鲤;所述同源四倍体鲤F1进行人工催产时,先对父本亲鱼注射绒毛膜促性腺激素与黄体素释放激素类似物的混合催产剂进行催产,其中绒毛膜促性腺激素的用量为300IU/kg~400IU/kg,黄体素释放激素类似物的用量为6μg/kg~10μg/kg;3h~5h后再对母本亲鱼注射绒毛膜促性腺激素、黄体素释放激素类似物与地欧酮的混合催产剂进行催产,其中绒毛膜促性腺激素的用量为600IU/kg~

800IU/kg,黄体素释放激素类似物的用量为12μg/kg~20μg/kg,地欧酮的用量为1.5mg/kg~2.0mg/kg。

9.一种利用权利要求1-8中任一项所述建立方法得到的同源四倍体鲤品系选育同源三倍体鲤的方法,其特征在于,包括如下步骤:以二倍体鲤作为母本亲鱼,所述同源四倍体鲤作为父本亲鱼,进行倍间杂交,得到的后代即为所述同源三倍体鲤。

10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述杂交的具体操作包括如下步骤:在繁殖季节,水温维持在22℃~25℃,挑选2龄及2龄以上的能产生墨绿色卵子的二倍体鲤雌性个体,以及1龄及1龄以上的能产生乳白色精液的同源四倍体鲤的雄性个体,先对父本亲鱼注射绒毛膜促性腺激素与黄体素释放激素类似物的混合催产剂进行催产,其中绒毛膜促性腺激素的用量为300~400IU/kg,黄体素释放激素类似物的用量为6μg/kg~10μg/kg;3h~

5h后再对母本亲鱼注射绒毛膜促性腺激素、黄体素释放激素类似物与地欧酮的混合催产剂进行催产,其中绒毛膜促性腺激素的用量为1000IU/kg~1500IU/kg,黄体素释放激素类似物的用量为20μg/kg~25μg/kg,地欧酮的用量为1.8mg/kg~2.8mg/kg;然后将母本亲鱼与父本亲鱼按1︰(4~6)的数量比放入同一产卵池中待产,直至开始顺利产卵和产精;再进行人工干法授精,授精完成后的受精卵于22℃~24℃恒温、通气、流水的环境下孵化,待鱼苗孵化完成后进行专池饲养,直至鱼苗长到8~10cm长后,通过流式细胞DNA含量测定方法挑选出血细胞DNA含量为150的后代,即获得所述的同源三倍体鲤。