1.一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取脐带上的华通氏胶,离体培养得脐带间充质干细胞,记为P0代;
(2)传代3 5次,即至P3 P5代后,置于低氧环境中培养4 8h,并对细胞进行机械牵拉;步~ ~ ~骤(2)中所述的置于低氧环境中培养为:于(5±0.5)%CO2和(5±0.5)O2的条件下培养;所述对细胞进行机械牵拉的方法为:传代时将细胞转移至机械牵拉细胞培养盒中,细胞贴壁附着于机械牵拉细胞培养盒的弹性膜上生长;所述机械牵拉包括:一次将弹性膜拉长15%~
20%;
(3)恢复正常氧气浓度,继续培养;
(4)收集细胞上清液,超滤透析,收集截留液,即得脐带间充质干细胞因子;
(5)将所述制备得到的脐带间充质干细胞因子的浓缩液,加入冻干保护剂,冻干,即得;
所述冻干保护剂为:每100mL所述脐带间充质干细胞因子的浓缩液中,加入以下组分:5 20g ~脱脂乳粉、1 15g海藻糖、2 10g羧甲基纤维素、1 5g羟乙基淀粉、0.01 0.1g谷氨酰胺、1 5g~ ~ ~ ~ ~泊洛沙姆。
2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法,其特征在于, 步骤(1)所述的离体培养得脐带间充质干细胞,包括以下步骤:取脐带上的华通氏胶,置于培养皿中至贴壁后,加入培养基,于二氧化碳培养箱中培养;2 3日后,将其中一半的培养基更换为新鲜的培养基,继续培养4 5日,华通氏胶的组织~ ~块周边会有间充质干细胞克隆出现,更换新的培养基继续培养,至细胞融合度达到80% 90%~时,弃去组织块,即得。
3.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法,其特征在于,步骤(4)所述的超滤透析为:通过30 50KD的超滤膜进行超滤透析,取透析液;再将透析液通过90~
110D超滤膜,收集截流液。
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4.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法,其特征在于,所述冻干的条件为:以9 11℃/min的速度降至-60~-45℃,维持冷冻1 3小时;后置于真空冷冻~ ~干燥机中于压强10 50Pa,温度-38 35℃的条件下冻干20 48h。
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5.一种脐带间充质干细胞因子冻干粉,其特征在于,如权利要求1 4任一项所述的制备~方法制备得到。
6.如权利要求5所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉在制备促进伤口愈合的药物或医用材料中的应用。