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专利号: 2019100533780
申请人: 江苏理工学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-01
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种梯度pH法制备胸苷的方法,其特征在于,以DNA水解液为底物与胸腺嘧啶混合,以固定化大肠杆菌细胞为催化剂反应制备胸苷,在反应前期调节体系pH为弱酸性,在反应后期调节体系pH为弱碱性。

2.根据权利要求1所述的一种梯度pH法制备胸苷的方法,其特征在于,包括以下步骤制备胸苷:将DNA水解液和胸腺嘧啶混合,在反应前期加入磷酸盐缓冲溶液并调节体系pH值为5.0~6.0,加入固定化大肠杆菌细胞,在此弱酸性体系下于50~70℃反应2.0~2.5h,反应后期调节体系pH值为7.5~8.5,在此弱碱性体系下反应1.5~2.0h,反应结束;将反应液置于4℃冰箱2~5d,过滤,弃去滤渣,加入活性炭脱色,过滤得到透明液体,减压蒸干,得到微黄色固体粉末;然后用硅胶柱进行等度洗脱分离,制得白色晶体胸苷。

3.根据权利要求1或2所述的一种梯度pH法制备胸苷的方法,其特征在于,所述DNA水解液在磷酸盐缓冲溶液中的浓度为30~100mmol/L,固定化大肠杆菌细胞的质量浓度为80~

200g/L,胸腺嘧啶浓度为DNA水解液浓度的3倍。

4.根据权利要求2所述的一种梯度pH法制备胸苷的方法,其特征在于,所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.0。

5.根据权利要求1所述的一种梯度pH法制备胸苷的方法,其特征在于,所述固定化大肠杆菌细胞采用包埋-交联法以PVA和卡拉胶为包埋有机材料、活性炭为添加剂、饱和硼酸和KCI溶液为固定剂溶液制得,具体为:①将PVA浸泡在水中,加入卡拉胶,加热使两者充分溶解并灭菌,得到混合溶液并待用;

②将大肠杆菌种子接种于液体培养基中,依次经过培养、离心、洗涤和再次离心,得到大肠杆菌细胞;

③将步骤②的大肠杆菌细胞和灭菌活性炭加入到步骤①中的混合溶液中,混匀后,滴加灭菌固定剂溶液进行成型,得到固定化大肠杆菌细胞。

6.根据权利要求5所述的一种梯度pH法制备胸苷的方法,其特征在于,所述混合溶液中PVA的质量浓度为7~12%,卡拉胶的质量浓度为0.4~1.2%;所述大肠杆菌细胞和活性炭的质量比为5:1,大肠杆菌细胞的质量浓度为1~2g/L。

7.根据权利要求5所述的一种梯度pH法制备胸苷的方法,其特征在于,所述固定剂溶液为KCl-饱和硼酸溶液,其中KCl的质量分数为4%。