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专利号: 2019100125353
申请人: 信阳农林学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)外植体的取材:5~6月份,取4~5年生百子莲未开裂的小花苞,在无菌操作台上进行消毒处理,然后用ddH2O冲洗3~5次,用无菌滤纸吸干小花苞表面的水分,然后切取小花梗外植体,将小花梗外植体切成0.7~1.0cm的小段;

(2)愈伤组织的诱导:取0.7~1.0cm的小花梗外植体小段,平放状态接种于愈伤组织诱导培养基中,22~28℃暗培养12~18d,可见白色半透明的愈伤组织生成,30d天后进行愈伤组织的继代培养;

(3)愈伤组织的继代培养:取带有残留小花梗组织的愈伤组织细胞团,放置在愈伤组织继代培养基上,22~28℃暗培养,以60d为一个继代周期,继代培养2次,愈伤组织逐渐转变为微黄色;

(4)胚性愈伤组织的诱导:取不含残留小花梗组织的愈伤组织,放置在胚性愈伤组织诱导培养基上,22~28℃暗培养,60d后,微黄色愈伤组织表面出现单细胞起源的胚性愈伤组织;

(5)胚性细胞的成熟胚诱导:取0.5g胚性愈伤组织,放置在成熟胚诱导培养基上,22~

28℃光照培养,得到成熟胚;

(6)体胚苗的诱导:取0.25g成熟胚组织,放置在体胚苗诱导培养基上,22~28℃光照培养,30d后得到带有根系的体胚苗。

2.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述消毒处理的方法是:先在75%的乙醇溶液里浸渍1min,接着用ddH2O冲洗3~5次,然后在2%的次氯酸钠溶液里浸渍5min。

3.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述愈伤组织诱导培养基组分为:MS+2.0mg·L-1PIC+3%蔗糖+1%琼脂,pH5.8。

4.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(3)中,所述愈伤组织继代培养基组分为:MS+1.5mg·L-1PIC+3%蔗糖+1%琼脂,pH5.8。

5.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(4)中,所述胚性愈伤组织诱导培养基组分为:MS+1.5mg·L-1PIC+3%蔗糖+1%琼脂,pH5.8。

6.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(5)中,所述成熟胚诱导培养基的组分为:MS+2%蔗糖+1%麦芽糖+1%琼脂,pH5.8。

7.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(5)中,所述光照培养的光照强度为2500lx。

8.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(6)中,所述体胚苗诱导培养基的组成为:MS+2%蔗糖+多效唑0.5mg·L-1+0.6%琼脂,pH5.8。

9.如权利要求1至8任一项所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(6)中,所述光照培养的光照强度为3500lx。