1.一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)外植体的取材:5 6月份,取4 5年生百子莲未开裂的小花苞,在无菌操作台上进行~ ~
消毒处理,然后用ddH2O冲洗3~5次,用无菌滤纸吸干小花苞表面的水分,然后切取小花梗外植体,将小花梗外植体切成0.7 1.0 cm的小段;
~
(2)愈伤组织的诱导:取0.7 1.0 cm的小花梗外植体小段,平放状态接种于愈伤组织诱~
导培养基中,22 28℃暗培养12 18 d,可见白色半透明的愈伤组织生成,30d天后进行愈伤~ ~
组织的继代培养;
(3)愈伤组织的继代培养:取带有残留小花梗组织的愈伤组织细胞团,放置在愈伤组织继代培养基上,22 28℃暗培养,以60 d为一个继代周期,继代培养2次,愈伤组织逐渐转变~
为微黄色;
(4)胚性愈伤组织的诱导:取不含残留小花梗组织的愈伤组织,放置在胚性愈伤组织诱导培养基上,22 28℃暗培养,60 d后,微黄色愈伤组织表面出现单细胞起源的胚性愈伤组~
织;
(5)胚性细胞的成熟胚诱导:取0.5 g胚性愈伤组织,放置在成熟胚诱导培养基上,22~
28℃光照培养,得到成熟胚;
(6)体胚苗的诱导:取0.25 g成熟胚组织,放置在体胚苗诱导培养基上,22 28℃光照培~
养,30 d后得到带有根系的体胚苗;
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步骤(2)中,所述愈伤组织诱导培养基组分为:MS + 2.0 mg∙L PIC + 3%蔗糖 + 1%琼脂,pH5.8;
‑1
步骤(3)中,所述愈伤组织继代培养基组分为:MS + 1.5 mg∙L PIC + 3%蔗糖 + 1%琼脂,pH5.8;
‑1
步骤(4)中,所述胚性愈伤组织诱导培养基组分为:MS + 1.5 mg∙L PIC + 3%蔗糖 +
1%琼脂,pH5.8;
步骤(5)中,所述成熟胚诱导培养基的组分为:MS + 2%蔗糖 + 1%麦芽糖 + 1%琼脂,pH5.8;
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步骤(6)中,所述体胚苗诱导培养基的组成为:MS + 2%蔗糖 + 多效唑0.5 mg·L +
0.6 %琼脂,pH5.8。
2.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述消毒处理的方法是:先在75%的乙醇溶液里浸渍1 min,接着用ddH2O冲洗3~5次,然后在2%的次氯酸钠溶液里浸渍5 min。
3.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(5)中,所述光照培养的光照强度为2500 lx。
4.如权利要求1至3任一项所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法,其特征在于,步骤(6)中,所述光照培养的光照强度为3500 lx。