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专利号: 2018115494407
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-07-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种无底物、非标记的电催化放大生物传感器的制备方法,其特征是,含铁富氮碳纳米管的制备:将双氰胺与亚铁盐在惰性气体氛围下加热至490~510℃自组装形成前体,将前体在惰性气体氛围下加热至890~910℃,煅烧后获得含铁富氮碳纳米管;

将含铁富氮碳纳米管和金纳米颗粒修饰至玻碳电极获得AuNP/FeCN/GCE电极,然后通过金-硫键将硫醇化的捕获探针固定在AuNP/FeCN/GCE电极,所述捕获探针为能够与目标microRNA杂交的单链DNA。

2.如权利要求1所述的制备方法,其特征是,自组装的时间为1.5~2.5小时;

或,所述前体在惰性气体氛围下加热至890~910℃的升温速率为10±0.5℃。

3.如权利要求1所述的制备方法,其特征是,将含铁富氮碳纳米管和金纳米颗粒修饰至玻碳电极获得AuNP/FeCN/GCE电极的过程中,先将含铁富氮碳纳米管溶液滴加至玻碳电极表面,干燥后,再向玻碳电极表面滴加金纳米颗粒溶液。

4.如权利要求1所述的制备方法,其特征是,捕获探针固定在AuNP/FeCN/GCE电极后,采用6-巯基己醇封闭未修饰的位点。

5.如权利要求1所述的制备方法,其特征是,所述捕获探针由5’到3’的序列为:CTC GGG GCA GCT CAG TAC AGG A-SH;

或,目标microRNA由5’到3’的序列为:

UCC UGU ACU GAG CUG CCC CGA G。

6.一种权利要求1~5任一所述的制备方法获得的生物传感器。

7.一种权利要求6所述的生物传感器在检测肺癌细胞中microRNA的应用。

8.基于无底物、非标记的电催化放大生物传感器检测肺癌细胞中microRNA的方法,其特征是,采用权利要求6所述生物传感器,将捕获探针与目标microRNA杂交,随后通过poly A聚合酶在microRNA的3’-OH末端多聚腺苷酸化形成poly A序列,然后将poly A序列与富T辅助探针杂交形成双链DNA,最后,将氧化还原分子硫堇插入到双链DNA凹槽中,使生物传感器中的含铁富氮碳纳米管催化硫堇产生增强的电化学信号,进行电化学信号检测。

9.如权利要求8所述的方法,其特征是,捕获探针与目标microRNA杂交的条件为37±

0.5℃,杂交时间为1.5~2.5小时;

或,形成poly A序列的过程为:将捕获探针与目标microRNA杂交后的电极与poly A聚合酶、ATP放置于poly A聚合酶延伸液中进行反应,优选的,反应条件为:温度37±0.5℃,时间55~65分钟;

或,富T辅助探针5’到3’的序列为:TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TT。

10.一种检测肺癌细胞中microRNA的试剂盒,其特征是,包括权利要求6所述的生物传感器、poly A聚合酶、富T辅助探针、硫堇;

优选的,富T辅助探针5’到3’的序列为:TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TT。