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专利号: 2018114078480
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种DNA表观遗传修饰的表面增强拉曼光谱检测方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1)制备周期性结构的金纳米孔阵列:将PMMA旋涂在玻璃基板上,然后将基板暴露于电子束,产生纳米孔阵列,在甲基异丁基酮/异丙醇溶液中显影后接着用异丙醇冲洗,然后通过热蒸发镀膜技术将金膜蒸发到纳米孔阵列上,得到所述周期性结构的金纳米孔阵列,清洗后备用;

所述金纳米孔阵列为层状结构,共有三层,底层为Si片,中间层为厚度200nm的PMMA纳米阵列,上层为50nm厚的金膜;金纳米孔阵列呈周期性排列的孔洞结构,孔为圆形,半径为

100nm,深度为200nm,孔与孔之间的距离为604nm;步骤2)配置DNA混合溶液:将不同表观遗传修饰的待测DNA分别溶解在Tris‑HCl缓冲液中得到DNA溶液,取DNA溶液与TCEP溶液常温下混合反应,得到所述DNA混合溶液;

所述待测DNA的表观遗传修饰方式包括5‑羟甲基胞嘧啶、5‑醛基胞嘧啶和5‑羧基胞嘧啶;

步骤3)不同DNA表观遗传修饰的拉曼检测:将步骤2)制得的DNA混合溶液滴涂在步骤1)制备的金纳米孔阵列中,0.5h后取出并用氮气吹干,用拉曼仪器在金纳米孔阵列表面不同区域处采集拉曼信号进行检测,观察不同待测DNA表观遗传修饰方式拉曼光谱图的特征差异,根据拉曼信号强度和位移的变化实现不同待测DNA表观遗传修饰的检测。

2.根据权利要求1所述的一种DNA表观遗传修饰的表面增强拉曼光谱检测方法,其特征在于,步骤2)所述DNA溶液与TCEP溶液的摩尔浓度比例为1:50。

3.根据权利要求1所述的一种DNA表观遗传修饰的表面增强拉曼光谱检测方法,其特征在于,步骤2)所述DNA溶液的配制过程为:将不同表观遗传修饰的待测DNA溶解在10mmol/L pH=7.4的Tris‑HCl溶液中,使其浓度为100μmol/L。

4.根据权利要求1所述的一种DNA表观遗传修饰的表面增强拉曼光谱检测方法,其特征在于,步骤3)所述采集拉曼信号进行检测的过程为:采用激发波长为785nm、功率为35mW的拉曼光谱仪,采集金纳米孔阵列表面50个不同区域的拉曼光谱,获得平均拉曼光谱。