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专利号: 2018113297387
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种基于荧光共振能量转移检测不同亚型乳腺癌细胞的试剂,其特征在于,包括A溶液和B溶液,所述A溶液是包含三种发夹型分子信标HP1、HP2、HP3的Tris溶液,HP1的3’端标记Cy3荧光供体基团、HP2的3’端标记Alexa488荧光供体基团、HP3的3’端标记Alexa405荧光供体基团;所述B溶液是包含三种发夹型分子信标HP4、HP5、HP6的Tris溶液,HP4的5’端标记Cy5荧光受体基团、HP5的5’端标记Cy3荧光受体基团、HP6的5’端标记Alexa488荧光受体基团;所述A溶液和B溶液在不同靶序列引发下反应后会产生三种由多个HP1‑HP4、HP2‑HP5、HP3‑HP6形成的多级发夹状DNA结构单元;所述HP1、HP2、HP3、HP4、HP5、HP6的碱基序列分别由SEQ ID NO.1‑6所示。

2.根据权利要求1所述的基于荧光共振能量转移检测不同亚型乳腺癌细胞的试剂,其特征在于,所述A溶液和B溶液中Tris的浓度为15‑20 mmol/L。

3.根据权利要求1所述的基于荧光共振能量转移检测不同亚型乳腺癌细胞的试剂,其特征在于,所述A溶液和B溶液中分子信标浓度均为5‑10 μmol/L长期储存浓度。

4.根据权利要求1所述的基于荧光共振能量转移检测不同亚型乳腺癌细胞的试剂,其特征在于,所述A溶液和B溶液中分子信标所用到的碱基序列在合成的同时分别对其两端的三个碱基进行硫代磷酸酯键修饰。

5.根据权利要求1所述的基于荧光共振能量转移检测不同亚型乳腺癌细胞的试剂,其特征在于,A溶液和B溶液在不同靶序列引发下反应后会产生三种由多个HP1‑HP4、HP2‑HP5、HP3‑HP6形成的多级发夹状DNA结构单元,它们满足荧光共振能量转移对供受体荧光基团距离的要求,从而使Cy3供体基团在543 nm激发光源激发后能量转移到受体Cy5上,导致Cy5荧光基团在发射波长665 nm处的红色荧光增强;Alexa488供体基团在488 nm激发光源激发后能量转移到受体Cy3上,导致Cy3荧光基团在发射波长562 nm处的黄色荧光增强;Alexa405供体基团在405 nm激发光源激发后能量转移到受体Alexa488上,导致Alexa488荧光基团在发射波长519 nm处的绿色荧光增强。

6.根据权利要求1所述的基于荧光共振能量转移检测不同亚型乳腺癌细胞的试剂,其特征在于,所述不同靶序列为miR‑let‑7a、miR‑141和miR‑21,其碱基序列分别由SEQ ID NO.9‑11所示。