利索能及
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专利号: 2018111776669
申请人: 新乡医学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-04-09
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种过表达载体pLV‑NKILA在制备骨组织损伤修复的试剂中的用途,其特征在于:所述过表达载体由NKILA基因片段与慢病毒空载体pLV构建而成;所述的NKILA基因片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO: 2所示,所述的慢病毒空载体pLV的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO: 3所示。

2.权利要求1所述的用途,其中所述过表达载体pLV‑NKILA的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:采用限制性内切酶BamH I和Xba I分别对慢病毒载体pLV以及NKILA基因片段进行双酶切,并采用T4 DNA连接酶体系对酶切后的NKILA基因片段以及线性慢病毒载体pLV进行连接反应,然后转化感受态细胞,筛选阳性菌落,提取阳性菌落的质粒,得到所述的过表达载体pLV‑NKILA。

3.根据权利要求2所述的用途,其特征在于:所述NKILA基因片段的制备方法,包括以下步骤:依据长链非编码RNA‑NKILA的核苷酸序列,采用DNA合成仪,根据固相亚磷酰胺三酯法原理对NKILA基因片段进行双链合成,同时在其5’末端和3’末端上分别添加BamH I和Xba I酶切位点,得到含有特异性酶切位点的NKILA基因片段。

4.一种诱导型细胞在用于骨组织损伤修复的试剂中的用途,其特征在于:所述诱导型细胞由权利要求1所述的过表达载体pLV‑ NKILA转染HEK293T细胞构建而成。

5.权利要求4所述的用途,其中所述诱导型细胞的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:采用脂质体转染试剂,将过表达载体pLV‑ NKILA以及慢病毒包装质粒pSPAX2、pMD2G共同转染到包装细胞中,经培养后收集慢病毒上清液;然后将慢病毒上清液加入到细胞载体中,经培养后得到稳定表达长链非编码RNA‑NKILA的诱导型细胞。