1.长链非编码RNA-HOXA-AS2在骨组织损伤修复中的应用,所述长链非编码RNA-HOXA-AS2的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。
2.一种用于骨组织损伤修复的过表达载体pLV-HOXA-AS2,其特征在于:由HOXA-AS2基因片段与慢病毒空载体pLV构建而成;所述HOXA-AS2基因片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示,所述慢病毒空载体pLV的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:3所示。
3.权利要求2所述过表达载体pLV-HOXA-AS2的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:采用限制性内切酶BamH I和Xba I分别对慢病毒载体pLV以及HOXA-AS2基因片段进行双酶切,并采用T4DNA连接酶体系对酶切后的HOXA-AS2基因片段以及线性慢病毒载体pLV进行连接反应,然后转化感受态细胞,筛选阳性菌落,提取阳性菌落的质粒,得到所述的过表达载体pLV-HOXA-AS2。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述HOXA-AS2基因片段的制备方法,包括以下步骤:依据所述长链非编码RNA-HOXA-AS2的核苷酸序列,采用DNA合成仪,根据固相亚磷酰胺三酯法原理对HOXA-AS2基因片段进行双链合成,同时在其5’末端和3’末端上分别添加BamH I和Xba I酶切位点,得到含有特异性酶切位点的HOXA-AS2基因片段。
5.一种用于骨组织损伤修复的诱导型细胞,其特征在于:由权利要求2所述的过表达载体pLV-HOXA-AS2转染细胞载体构建而成。
6.权利要求5所述诱导型细胞的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:采用脂质体转染试剂,将过表达载体pLV-HOXA-AS2以及慢病毒包装质粒pSPAX2、pMD2G共同转染到包装细胞中,经培养后收集慢病毒上清液;然后,将慢病毒上清液加入到细胞载体中,经培养后得到稳定表达长链非编码RNA-HOXA-AS2的诱导型细胞。
7.长链非编码RNA-HOXA-AS2在骨组织损伤修复检测中的应用,所述长链非编码RNA-HOXA-AS2的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。
8.一种用于骨组织损伤修复检测的试剂盒,其特征在于,含有用于检测HOXA-AS2基因表达量的特异性引物;所述特异性引物包括:上游引物:5’-GTTCAGCTCAAGTTGAACATA-3’,
下游引物:5’-AAACCTTGTAGATAGCTTGAG-3’。
9.一种骨组织损伤修复检测方法,包括以下步骤:
1)取待测样品,采用RNA提取试剂盒,提取其总RNA;
2)采用逆转录试剂盒,对所提取的总RNA进行逆转录反应,获得cDNA;
3)以逆转录反应得到的cDNA为模板,采用权利要求8所述的特异性引物,进行荧光定量PCR反应,测定样品中的HOXA-AS2表达量。
10.根据权利要求9所述的检测方法,其特征在于:采用2-ΔΔCT相对定量法计算待测样品中的HOXA-AS2表达量。