1.基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电化学传感器,其为三电极体系传感器,所述的三电极中的辅助电极为铂电极,参比电极为Ag/AgCl电极,工作电极为基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电极,其特征在于:所述的基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电极上修饰有Cu-CAT膜,Cu-CAT膜上吸附有ExoⅢ酶剪切DNA/miRNA-21后的核苷酸产物。
2.如权利要求1所述的基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电化学传感器,其特征在于:
以Cu作为信号源,RNA作为目标链,在miRNA-21的浓度范围为0.01fmol/L-10nmol/L的情况下,Cu-CAT还原峰电流(Ip)与互补序列浓度对数值(lgCmiRNA-21)呈良好的线性关系。
3.基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电化学传感器的检测方法,具体如下:
步骤一:依次采用i-t法和循环伏安法在玻碳电极修饰上Cu和CAT,进而使二者反应形成Cu-CAT膜,形成Cu-CAT修饰玻璃电极;
步骤二:将与miRNA-21互补配对的DNA与miRNA-21混合,培养形成DNA-RNA复合链后,加入ExoⅢ剪切酶,反应得到RNA及DNA碎片,再将步骤一制得的Cu-CAT修饰玻璃电极浸入该溶液中反应,然后用二次蒸馏水淋洗,得到基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电极;
步骤三:将步骤二电极作为工作电极,铂电极作为辅助电极,Ag/AgCl电极作为参比电极,建立三电极体系传感器,在检测液中进行微分脉冲伏安法检测,得到响应电流的数值;
步骤四:更换miRNA-21的浓度,重复步骤二和步骤三,测得不同miRNA-21浓度下对应的响应电流,计算出响应电流与miRNA-21浓度的线性关系;
步骤五:对待检测样进行步骤二到步骤三的过程,得到对应的响应电流数值,利用步骤四所得的线性关系计算出miRNA-21浓度。
4.如权利要求3所述的基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电化学传感器的检测方法,具体步骤如下:步骤一:将预处理过的玻碳电极置于Cu(NO3)2和N,N-甲基吡咯烷酮(NMP)混合液中进行i-t法扫描电沉积Cu单质膜,Cu(NO3)2的浓度为1~1000mmol/L,N,N-甲基吡咯烷酮(NMP)的浓度为1~1000mmol/L;然后将电极在CAT和NMP混合液中进行循环伏安法扫描,CAT的浓度为1-1000mmol/L,NMP的浓度为1-1000mmol/L,然后用二次蒸馏水洗涤,得到Cu-CAT修饰传感电极,记为:Cu-CAT/GCE;
步骤二:将与miRNA-21互补配对的DNA和miRNA-21混合,混合后DNA浓度为0.01-
1000nmol/L,miRNA-21浓度为0.01fmol/L-10nmol/L,混合液在15-50℃恒温培养20-240min形成DNA-RNA复合链后,加入0.01-50U/μL ExoⅢ剪切酶,在15-50℃反应20-240min,得到RNA及DNA碎片,再将步骤(1)制得的Cu-CAT/GCE浸入溶液15-50℃反应20-240min,然后用二次蒸馏水淋洗,得到基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电极;
步骤三:将步骤二电极作为工作电极,铂电极作为辅助电极,Ag/AgCl电极作为参比电极,建立三电极体系传感器,置于检测液中进行微分脉冲伏安法检测,得到响应电流的数值,所述的检测液为含0.01-1000mmol/L NaCl和0.01-1000mmol/L MgCl2的磷酸盐,pH值为
6.0-8.0之间的PBS缓冲溶液;
步骤四:依次更换miRNA-21的浓度,重复步骤二和步骤三,测得不同miRNA-21浓度下对应的响应电流,计算出响应电流与miRNA-21浓度的线性关系;
步骤五:在检测样品时,对待检测样品进行步骤二到步骤三的过程,得到对应的响应电流数值,利用步骤四所得的线性关系计算出miRNA-21浓度。
5.如权利要求4所述的基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电化学传感器的检测方法,其特征在于:步骤二所述的DNA浓度为1~10nmol/L。
6.如权利要求4所述的基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电化学传感器的检测方法,其特征在于:步骤二中ExoⅢ剪切酶加入浓度为0.1-10U/μL。
7.如权利要求3所述的基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电化学传感器的检测方法,其特征在于:所述的响应电流为Cu-CAT还原峰电流(Ip)。
8.如权利要求4所述的基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电化学传感器的检测方法,其特征在于:步骤四中,以Cu作为信号源,RNA作为目标链,在miRNA-21的浓度范围为
0.01fmol/L-10nmmol/L的情况下,Cu-CAT还原峰电流(Ip)与互补序列浓度对数值(lgCmiRNA-21)呈良好的线性关系。
9.如权利要求8所述的基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电化学传感器的检测方法,其特征在于:在miRNA-21的浓度为0.01~10fmol/L时,Cu-CAT还原峰电流(Ip)值为4.202×10-5A~5.938×10-5A,线性回归方程为Ip(10-5A)=-4.06-0.58lg(CmiRNA-21/mol/L),相关性系数为r=0.990;在miRNA-21的浓度为10fmol/L~10nmol/L时,Cu-CAT还原峰电流(Ip)值为
3.222×10-5A~4.202×10-5A,线性回归方程为Ip(10-5A)=1.93-0.16lg(CmiRNA-21/mol/L),相关性系数为r=0.997。
10.如权利要求4所述的基于铜-六羟基三亚苯的miRNA-21电化学传感器的检测方法,其特征在于:该检测方法的miRNA-21检测下限为0.01fmol/L。