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专利号: 2018109979519
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种定向、高效培育耐盐水稻品种的育种方法,其基于CRISPR/Cas9基因编辑技术获得耐盐性突体体植株,其特征在于:在受体水稻材料OsRR22的始密码子ATG后第308至721位的第3个CDS区的序列中,选择SEQ ID NO.2所示序列作为特异性靶位点。

2.如权利要求1所述的育种方法,其特征在于:获得突体体植株的具体方法为:(1)构建含所述靶位点序列片段的基因编辑重组载体;

(2)将所构建的基因编辑重组载体转入受体亲本水稻愈伤组织中得到转基因植株;

(3)筛选上述转基因植株,获得转基因阳性植株;

(4)对上述转基因阳性植株进行靶位点扩增、测序,筛选获得靶向发生突变的突变体。

3.如权利要求1所述的育种方法,其特征在于:所述基因编辑重组载体是pCRISPR/Cas9重组载体。

4.如权利要求2所述的育种方法,其特征在于:进一步包括下述步骤:

(5)对上述突变体加代种植后筛选获得不含转基因成分的纯合稳定突变株系;

(6)对上述纯合突变株系进行盐胁迫处理筛选获得耐盐性显著提高的突变株系,优选地所述第(6)步中,还包括对其以受体亲本作为母本进行回交2-3代纯化背景,再选择经回交纯化、株叶形态与母本一致的稳定突变株系作为耐盐优良亲本。

5.如权利要求4所述的育种方法,其特征在于:进一步包括下述步骤:

(7)对上述耐盐优良亲本进行杂交配组、耐盐鉴定试验,选育不含转基因成分、强耐盐、强优势的组合作为耐盐杂交稻新品种;

优选地,所述步骤(7)具体为:对耐盐优良亲本进行杂交配组试验,将杂交种和对照品种进行盐胁迫盆栽试验对其生长势进行观察、测定其地上部分的组织中Na+含量和K+/Na+含量比,选育不含转基因成分、强耐盐、强优势的杂交稻新品种。

6.如权利要求4所述的育种方法,其特征在于:所述步骤(1)和步骤(2)中通过潮霉素基因分子检测鉴定获得阳性转基因水稻植株。

7.如权利要求6所述的育种方法,其特征在于:所述步骤(5)具体为:收获T0代突变植株的种子,继续种植T1代分离群体,通过潮霉素分子检测、靶点扩增测序分析获得靶位点基因型纯合且不含转基因成分的稳定突变植株,加代繁殖成纯合稳定突变株系。

8.如权利要求4所述的育种方法,其特征在于:所述步骤(6)具体为:收获T1代不含转基因成分、纯合突变株系的种子,继续播种成苗,于三叶一心期时,放入浓度为0.8%的氯化钠水溶液胁迫处理7d后进行耐盐性评价,筛选获得耐盐性显著提高的耐盐优良亲本。

9.一种定向、高效培育耐盐水稻品种的育种方法,其特征在于:基于CRISPR/Cas9基因编辑技术对受体水稻材料OsRR22基因进行基因编辑,获得耐盐突变系,其后再以耐盐突变系为亲本通过杂交配组方式选育强耐盐、强优势杂交水稻新品种。

10.如权利要求9所述的育种方法,其特征在于:其中是选择SEQ ID NO.2所示序列作为特异性靶位点。