1.一种含羟基的神经类固醇的检测分析方法，其特征在于，该方法以d0/d3-3-N-甲基-

2-羧基罗丹明6G-d0/d3-MCR6G作为同位素标记衍生试剂，以d0-MCR6G作为同位素标记衍生试剂衍生待测实际样品，以d3-MCR6G作为同位素标记衍生试剂衍生标准品，以d3-MCR6G标记的标准品作为内标，将得到的的待测实际样品衍生物和标准品衍生物混合，使用磁分散固相萃取技术纯化和富集，经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测；

其中 ，所述d 0-MC R6G为 ；所述d3- MCR6G 为

；

具体包括以下步骤：

a. 稳定同位素标记衍生：将20-100 μL混合标准品或待测实际样品分别置于离心管中，将d0-MCR6G乙腈溶液加入待测实际样品中，并将d3-MCR6G乙腈溶液快速注入标准品溶液中，然后分别加入50 μL 2-氯-1-甲基碘代吡啶和50 μL 4-二甲氨基吡啶乙腈溶液，密封两个离心管，超声波震荡30秒，在微波反应器中进行衍生反应，所述衍生反应为在30-85℃条件下反应5-35 min；将d0-MCR6G标记的待测实际样品和d3-MCR6G标记的标准品按体积比1:1混合，摇匀得衍生产物溶液；

b. 磁分散固相萃取及分析：取4-12 mg四氧化三铁修饰的氧化石墨烯Fe3O4/GO纳米材料通过超声分散到上述衍生产物溶液中；然后涡旋振荡2-10 min后，采用外加磁铁的方式实现混合物的分离；将沉淀物中加入0.2-0.8 ml 解吸溶液，涡旋振荡6 min解吸，然后用外部磁场分离，收集上层清液经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测；所述解吸溶液为含0.1%的甲酸的乙醇、乙腈、丙酮或甲醇；

所述神经类固醇为含有活性羟基的如下化合物：α-雌二醇、四氢孕酮、去氢表雄酮、睾酮、孕烯醇酮、17α-羟基孕烯醇酮、17α-羟孕酮；

所述超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统中色谱分离使用安捷伦SB C18色谱柱：

2.1 mm × 50 mm，1.8 µm，进样体积为2 µL，柱温30℃，采用线性梯度洗脱法；

所述线性梯度洗脱法，时间为10 min，流速为0.2 mL/min，流动相A为5%乙腈水溶液含有0.1%甲酸，流动相B为乙腈含有0.1%甲酸，0 min流动相组成为80%A+20%B，5 min流动相组成为25%A+75%B，7 min流动相组成为5%A+95%B，10 min流动相组成为0%A+100% B；

所述质谱的条件为：干燥气温度300℃，流速10 L/min，喷雾器气压40 psi，鞘气温度

280℃，流速11 L/min，毛细管电压3.5 kV。

2.根据权利要求1所述的检测分析方法，其特征在于，2-氯-1-甲基碘代吡啶乙腈溶液的浓度为4–15wt%；所述4-二甲氨基吡啶乙腈溶液的浓度为1–10wt%； d0-MCR6G乙腈溶液 与d3-MCR6G乙腈溶液的摩尔浓度均为1×10-4mol/L；所述微波反应器的功率为750W。

3.根据权利要求2所述的检测分析方法，其特征在于，所述衍生反应的温度为70℃，反应的时间为15min。

4.根据权利要求1或2所述的检测分析方法，其特征在于，所述d0/d3-3-N-甲基-2-羧基罗丹明6G-d0/d3-MCR6G采用以下方法制备而成：将1g罗丹明6G溶于30mL DMF中，室温下搅拌

5分钟后，缓慢加入0.217g NaH反应3分钟，然后在3-5分钟内加入330 μL CH3I或CD3I，室温反应150分钟后，加入150 mL水终止反应，用150 mL氯仿萃取混合物两次，合并有机层并减压蒸馏得粗产物，经体积比1：1混合的甲醇/氯仿重结晶，得到紫红色固体产物d0-MCR6G或d3-MCR6G。

5.根据权利要求1所述的检测分析方法，其特征在于，所述的四氧化三铁修饰的氧化石墨烯Fe3O4/GO纳米材料采用以下方法制备得到：将0.5 g Fe3O4分散在1 M HNO3中，然后0.1 g氧化石墨烯超声处理30 min制备得到1 mg/mL的氧化石墨烯水溶液分散体，将上述得到的Fe3O4溶液添加到GO分散液中，机械搅拌30 min后，经离心并施加外部磁铁从深黑色溶液分离出Fe3O4/GO固体，将该固体用高纯水洗涤5次，并在真空烘箱中60℃下干燥得到磁性材料。

6.根据权利要求1所述的检测分析方法，其特征在于，所述解吸溶液为含0.1%甲酸的甲醇。