1.一种源自放线菌的转氨酶,其特征在于所述转氨酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。
2.一种权利要求1所述的转氨酶在合成R-3-氨基丁醇中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述R-3-氨基丁醇合成方法为:以含转氨酶编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以丁酮醇为底物,以辅酶磷酸吡哆醛为辅因子,以异丙胺或D-丙氨酸为氨基供体,以乙腈或二甲基亚砜为助溶剂,以pH5.0~9.0的缓冲液为反应介质构成反应体系,在温度20~45℃条件下进行转化反应,反应结束后,将反应液分离纯化,获得R-3-氨基丁醇;反应体系中,底物终浓度为20-500mM,辅因子终浓度0.1-2mM,氨基供体终浓度为0.04-3M,助溶剂体积浓度0.1%-15%,催化剂用量以湿菌体重量计为10-100g/L。
4.一种权利要求1所述源自放线菌的转氨酶突变体,其特征在于所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第80位、294位进行单突变或双突变获得的。
5.如权利要求4所述的转氨酶突变体,其特征在于所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第80位缬氨酸突变为甘氨酸,同时将第294位苏氨酸突变为丝氨酸获得的。
6.一种权利要求5所述转氨酶突变体的编码基因,其特征在于所述编码基因核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示。
7.一种权利要求6所述的转氨酶突变体编码基因构建的重组基因工程菌。
8.一种权利要求4所述的转氨酶突变体在合成R-3-氨基丁醇中的应用。
9.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述R-3-氨基丁醇合成方法为:以含转氨酶突变体编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以丁酮醇为底物,以辅酶磷酸吡哆醛为辅因子,以异丙胺或D-丙氨酸为氨基供体,以乙腈或二甲基亚砜为助溶剂,以pH5.0~9.0的缓冲液为反应介质构成反应体系,在温度20~45℃条件下进行转化反应,反应结束后,将反应液分离纯化,获得R-3-氨基丁醇;反应体系中,底物终浓度为20-
500mM,辅因子终浓度0.1-2mM,氨基供体终浓度为0.04-3M,助溶剂体积浓度0.1%-15%,催化剂用量以湿菌体重量计为10-100g/L。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:
1)斜面培养:将含转氨酶突变体编码基因的重组菌基因工程菌接种至含50μg/ml卡那霉素的LB培养基,在37℃培养16h,获得斜面菌体;所述LB培养基质量终浓度组成为:蛋白胨
10g/L,酵母提取物5g/L,氯化钠10g/L,1.5%琼脂,溶剂为去离子水,pH 7.0;
2)种子培养:将斜面菌体接种至含50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基,在37℃培养8~
10h,获得种子液;所述LB液体培养基终浓度组成为:蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,氯化钠
10g/L,溶剂为去离子水,pH 7.0;
3)发酵培养:将种子液以体积浓度1%的接种量接种到含50μg/ml卡那霉素抗性的LB液体培养基中,置于37℃下培养至OD600值为0.4,加入终浓度0.1mM异丙基-β-D-半乳糖苷或终浓度15g/L乳糖,置于28℃继续培养12h,离心,收集湿菌体。