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专利号: 2018103018607
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:利用转人FGF1基因蚕丝提取含人FGF1蛋白的丝胶蛋白,得含人FGF1蛋白的丝胶蛋白溶液,然后经复性后再用水透析得FGF1丝胶蛋白水溶液,离心获得FGF1丝胶蛋白水凝胶,然后在4℃放置,化学交联剂交联或诱导剂诱导形成FGF1丝胶蛋白凝胶材料。

2.根据权利要求1所述具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法,其特征在于:所述提取为将转人FGF1基因蚕丝经过液氮研磨成粉末,加水制成50mg/ml的浓度,利用抽提缓冲液在萃取,然后于4℃条件下,18,000rpm条件下离心10min,上清液即为含人FGF1蛋白的丝胶蛋白溶液。

3.根据权利要求2所述具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法,其特征在于:所述抽提缓冲液为pH 7.0、含50mM Tris-HCl和8M尿素的溶液;或浓度为9.3M的LiBr;或浓度为0.02M的Na2CO3。

4.根据权利要求2所述具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法,其特征在于:所述萃取为使用pH 7.0、含50mM Tris-HCl和8M尿素的溶液在80℃条件下萃取1h。

5.根据权利要求1所述具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法,其特征在于:所述复性为利用二硫苏糖醇/谷胱甘肽氧化还原系统复性。

6.根据权利要求1所述具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法,其特征在于:所述复性为将含人FGF1蛋白的丝胶蛋白在透析液中、4℃透析上清液12h,然后利用对半稀释法用复性液对透析液进行置换,重复4次,每次12h,再用水透析去除复性液,最后将复性的含有重组FGF1蛋白的丝胶蛋白溶液在4℃、4000rmp条件下离心10min,收集沉淀即可。

7.根据权利要求5所述具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法,其特征在于:所述透析液各组分浓度如下:尿素8M,二硫苏糖醇1mM,Tris-Cl 50mM、pH 7.0;NaCl 

250mM;所述复性液各组分浓度如下:谷胱甘肽2.0mM;氧化谷胱甘肽0.2mM;二硫苏糖醇1mM;

Tris-Cl 50mM、pH 7.0;NaCl 250mM。

8.由权利要求1~7任一项所述的制备方法制得的具有具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法。