1.一种人脐带血干细胞的分离培养方法,包括:
(1)脐带血全血细胞分离和血浆的预处理;
(2)细胞培养皿包被抗CD34抗体和抗CD44抗体,包括分别取抗CD34抗体和抗CD44抗体以0.01M,pH9.6的缓冲液稀释至10μg/L,向细胞培养皿中加入等量的抗CD34抗体稀释液和抗CD44抗体稀释液,4℃过夜,倾去多余的液体;
(3)向细胞培养皿中加入步骤(1)制备的脐带血全血细胞,去掉未结合的细胞;
(4)加入预处理的血浆和细胞培养液;
其中,所述步骤(1)包括取抗凝脐带血,2000rpm离心10min,取上层血浆,向下层的血细胞中加入HANK’S液重悬备用,所述步骤(1)中血浆预处理包括56℃保温30min。
2.如权利要求1所述的一种人脐带血干细胞的分离培养方法,其特征在于,所述的培养皿为聚苯乙烯培养皿。
3.如权利要求1所述的一种人脐带血干细胞的分离培养方法,其特征在于,所述步骤(3)包括向培养皿中加入浓度为1×104-1×106个/mL的脐带血全血细胞,37℃静置2h,轻摇,去掉未结合的细胞。
4.如权利要求1所述的一种人脐带血干细胞的分离培养方法,其特征在于,所述步骤(4)包括将步骤(1)中预处理的血浆按体积比1:1加入1640细胞培养液,然后加入步骤(3)的细胞培养皿中,37℃,5%CO2中培养。
5.如权利要求4所述的一种人脐带血干细胞的分离培养方法,其特征在于,所述1640细胞培养液含有10%的灭活人血清。
6.如权利要求1所述的一种人脐带血干细胞的分离培养方法,其特征还在于细胞培养液中还添加有纤连蛋白,所述纤连蛋白的添加量为相对于培养皿底面积2μg/cm2。
7.如权利要求1所述的一种人脐带血干细胞的分离培养方法,其特征在于还包括步骤(5)全血细胞培养过夜或培养8h后,用添加有纤维蛋白、纤连蛋白的1640完全培养液换液,每24h换液一次,三日后消化传代。