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专利号: 2018101828667
申请人: 青岛大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-06-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测金黄色葡萄球菌的引物组合物,其特征是,包括SEA-SA-P1和SEA-SA-P2,所述SEA-SA-P1由5′端到3′端的序列为ACCGCATGGTTCAAAAGTGAA;

所述SEA-SA-P2由5′端到3′端的序列为TATAAGTGACAGCAAGACCGTC。

2.一种检测金黄色葡萄球菌的试剂盒,其特征是,包括上述引物组合物、扩增缓冲液、脱氧核糖核苷酸、绿色荧光核酸染料和DNA聚合酶;

优选的,包括二次蒸馏水。

3.如权利要求2所述的试剂盒,其特征是,扩增缓冲液、脱氧核糖核苷酸、SEA-SA-P1溶液、SEA-SA-P2溶液、绿色荧光核酸染料和DNA聚合酶的体积比为1:0.78~0.82:1.48~

1.52:1.48~1.52:0.248~0.252:0.18~0.22;

优选的,SEA-SA-P1溶液和SEA-SA-P2溶液的浓度均为9.9~10.1μM。

4.一种权利要求1所述的引物组合物或权利要求2~3任一所述的试剂盒在链交换扩增检测金黄色葡萄球菌中的应用。

5.一种金黄色葡萄球菌链交换扩增检测方法,其特征是,将权利要求1所述的引物组合物、扩增缓冲液、脱氧核糖核苷酸、绿色荧光核酸染料、DNA聚合酶、靶标和水混合均匀后加热反应后,检测反应后的物料的荧光值。

6.如权利要求5所述的检测方法,其特征是,扩增缓冲液、脱氧核糖核苷酸、SEA-SA-P1溶液、SEA-SA-P2溶液、绿色荧光核酸染料、DNA聚合酶和靶标的体积比为1:0.78~0.82:

1.48~1.52:1.48~1.52:0.248~0.252:0.18~0.22:0.9~1.1。

7.如权利要求6所述的检测方法,其特征是,SEA-SA-P1溶液和SEA-SA-P2溶液的浓度均为9.9~10.1μM;

或,加入1μL扩增缓冲液、0.78~0.82μL脱氧核糖核苷酸、1.48~1.52μL SEA-SA-P1溶液、1.48~1.52μL SEA-SA-P2溶液、0.248~0.252μL绿色荧光核酸染料、0.18~0.22μL DNA聚合酶、0.9~1.1μL靶标后再加入水使反应体系的总体积为10μL。

8.如权利要求5所述的检测方法,其特征是,反应温度为37~95℃;优选的,所述反应温度为61℃。

9.如权利要求5所述的检测方法,其特征是,反应时间为43~80min。

10.如权利要求5~9任一所述的检测方法,其特征是,将权利要求1所述的引物组合物、扩增缓冲液、脱氧核糖核苷酸、绿色荧光核酸染料、DNA聚合酶、标准靶标和水混合均匀后获得标准靶标的反应体系,将不同浓度标准靶标的反应体系分别进行加热反应,检测不同浓度标准靶标的反应体系反应后的物料的标准荧光值,建立浓度与标准荧光值的标准方程,将上述引物组合物、扩增缓冲液、脱氧核糖核苷酸、绿色荧光核酸染料、DNA聚合酶、样品靶标和水混合均匀后获得样品靶标的反应体系,将样品靶标的反应体系加热反应后,检测样品靶标的反应体系反应后的物料的样品荧光值,将样品荧光值通过标准方程计算获得样品靶标的浓度。