1.一种龟背竹组织培养的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(一)外植体的预处理:剪取龟背竹的茎顶或者腋芽作为外植体,将外植体剪成 4-6cm 的条状物,然后用70%酒精将外植体浸泡3-5s,然后置于1-1.5%次氯酸钠溶液中浸泡15-
30min,浸泡过程不断进行振荡,浸泡完成后用无菌水将外植体冲洗 4-6 次,然后放置于无菌接种盘吹干其表面水分,切去叶片以及旧的切口,切成 2-2.5cm 带 2-3 个芽的茎段,将带芽茎段置于自来水下冲洗 30min,用滤纸吸干带芽茎段备用;
(二)培养基的培养:
(1)诱导培养:将上述步骤获得的带芽茎段先接种到诱导培养基上,黑暗条件下培养5-
10天,然后按光照和黑暗时间比为 2:1 交替进行诱导培养,诱导新芽长高至 4-5cm 后,将新芽的叶片切去,切成 2-3cm 的茎段;
所述诱导培养基含有 MS+1.5mg/L KT +0.5mg/L 6-BA +0.1mg/L IBA +4.5g/L 琼脂+
30g/L 蔗糖;
(2)增殖培养:将步骤(1)培养后处理得到的茎段接种到增殖培养基上培养 35-40 天后,将新芽转到新的增殖培养基培养,增殖倍数达到 3-4 倍;
所述增殖培养基的成分为:MS+1.0mg/L KT +0.2mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA+3.5g/L 琼脂+25g/L 蔗糖;
(3)生根培养:将经步骤(2)增殖培养得到的丛芽切除其多余的侧面芽或不定芽,按照高度为 1.5-3cm 将具有单芽的小枝剪切下来,然后将剪切后的小枝放到生根培养基进行生根培养,培养 20-25 天后即可出瓶炼苗;
所述生根培养基的成分为:1/2 改良 MS+ 0.1-1mg/L IBA+1.5-2.0mg/L 生根粉+4-
4.5g/L 琼脂+25-30g/L 白糖;
(三)大棚炼苗:用镊子将小苗从培养器皿中取出,用自来水将小苗根部的培养基洗净, 然后种植到培养土苗盘里并喷淋定根水,待叶面干后,喷施 800-1000 倍液的百菌清,7-15 天后喷施 20-30 倍的沼液,在大棚内培育 3-5 个月后进行移栽;
所述组织培养方法还包括生根苗移栽的步骤,具体为:炼苗 20-30 天待根系由白色转变成灰白色后,将生根苗进行移栽,移栽时先将生根苗置于清水中漂洗,洗净根部的培养基,然后将生根苗浸泡于生根剂中 5-10 分钟,再将生根苗栽入装有混合基质的容器中培养,所述混合基质是由体积比为 1:1-2:2-3 的蛭石粉、风化煤与米糠混合而成;
所述步骤(3)中改良 MS 包括 30-45 重量份的常量营养元素、0.3-0.6 重量份的微量营养元素和 5-10 重量份的有机试剂;所述常量营养元素的组分和其对应的浓度为: 复硝酚钠 150-200mg/L、硫酸铵 160-210mg/L、七水硫酸镁320-390mg/L 和油菜素甾醇 30-
80mg/L;所述微量营养元素的组分和其对应的浓度为: 硫酸锰 15-18mg/L、硼酸 2-4mg/L、碘化钾 1-2mg/L、钼酸钠0.2-0.4mg/L、氯化钴 0.05-0.08mg/L 和五水合硫酸铜 0.02-
0.03mg/L;所述有机试剂的组分和其对应的浓度为:甘氨酸 1-3 mg/L、烟酸 1-3 mg/L、盐酸吡哆醇 1-2mg/L、肌醇 102-112 mg/L。
2.根据权利要求 1 所述的一种龟背竹组织培养的方法,其特征在于,所述步骤(1)诱导培养的条件为:培养温度为 23-27℃,湿度为 68-82%,PH 值为 5.6-6.0,是先进行暗培养 4-5 天,再转入光培养,其中,光培养的光照强度为 1500-2000Lux,光照时间为每天
12-14h。
3.根据权利要求 1 所述的一种龟背竹组织培养的方法,其特征在于,所述步骤(2)增殖培养是在温度为 25-30℃,湿度为 50-75%,PH 值为 5.6-6.0 的条件下进行的,所述增殖培养光照强度为 1800-2200Lux,光照时度为 10-15h/天。
4.根据权利要求 1 所述的一种龟背竹组织培养的方法,其特征在于,所述步骤(3)生根培养的条件为:光照强度 2000-2500Lux,光照时间 10-13 小时/d,温度 25-30℃。