1.应用于厌氧菌和兼性厌氧菌筛选阳性克隆菌株的方法，其特征是：该筛选阳性克隆菌株的方法包括如下具体步骤：

第一步是从Escherichia coli DH5α提取catalase基因：Escherichia coli DH5α菌株培养使用LB培养基，37℃试管振荡摇床培养至OD660为0.6，提取菌全基因放置-20℃冰箱保存备用；Escherichia coli DH5α菌株有二种catalase基因，一种为锰过氧化氢酶Mn-dependent catalase基因，另一种为heme过氧化氢酶heme-dependent catalase基因；根据Escherichia coli DH5α的heme过氧化氢酶基因序列设计上下游引物，提取heme过氧化氢酶基因放置-20℃冰箱保存备用；

第二步是从Bifidobacterium longum  ATCC 15707提取启动子和终止子基因：

Bifidobacterium longum ATCC 15707菌株培养使用MRS培养基，37℃螺口厌氧试管静置培养至OD660为0.6，提取菌全基因放置-20℃冰箱保存备用；根据Bifidobacterium longum 的hup基因启动子和终止子序列设计上下游引物，提取hup基因启动子和终止子基因放置-

20℃冰箱保存备用；

第三步是catalase表达序列组装进pKKT427质粒：把Bifidobacterium longum  ATCC 

15707的hup启动子和终止子与Escherichia coli的heme过氧化氢酶基因组装成表达序列hpCATht连接进Bifidobacterium - E.coli穿梭质粒pKKT427，形成新的具有表达heme过氧化氢酶基因的质粒pKKT-CAT；

第四步是质粒pKKT-CAT转化进Bifidobacterium longum  ATCC 15707：制备Bifidobacterium longum ATCC 15707感受态细胞后，pKKT-CAT电转化进Bifidobacterium longum ATCC 15707，电转化条件为：使用2mm电转盒，12.5kV/cm，200Ω，电转时间在 3.9~

4.2 ms；转化液稀释10到10000倍后，分别涂布于含有10µM hemin的含质粒抗性抗生素的MRS培养皿；将涂布的培养皿放入厌氧袋37℃培养1-2天至菌落出现，选用菌落数在10 50的~培养皿进行阳性克隆验证；

第五步是Bifidobacterium longum ATCC 15707阳性克隆验证：灭菌制备装有MRS液体培养基的螺口厌氧试管和牙签，用灭菌好的牙签挑取培养皿上的克隆至螺口厌氧试管，做好相应标记；随后在挑取后的培养皿上对应菌落滴加H2O2，有泡沫出现的即为阳性克隆；相对应的螺口厌氧试管进行37℃静置培养后做菌株保存或质粒提取；

第六步是目的基因转化进Bifidobacterium longum  ATCC 15707菌进行阳性克隆快速验证：目的基因与hpCATht序列连接成基因片段后，再与质粒pKKT427重组连接转化进Bifidobacterium longum ATCC 15707，重复步骤5进行阳性克隆验证。