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专利号: 2017113735067
申请人: 宁波大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.基于具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器,其特征在于该电化学生物传感器通过以下方法构建的:

首先,利用半胱氨酸和硝酸银合成类多肽结构的配位聚合物Cys-Ag(I)CP;然后将玻碳电极抛光洗净,电化学方法修饰石墨烯,再将配位聚合物滴涂于电极表面,得具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器CP/GO/GCE;最后,配制含不同浓度的乙酰胆碱酯酶和马拉硫磷反应液,检测电化学传感器对反应液的电化学响应。

2.如权利要求1所述的具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器,其特征是,石墨烯修饰玻碳电极的具体方法是:首先将裸玻碳电极GCE抛光清洗处理干净,氮气吹干;

然后将石墨烯借助循环伏安法设置电位-1.5~0.5V,扫速为10mV/s电沉积到裸玻碳电极上得到稳定的石墨烯修饰电极,即GO/GCE;其中,裸玻碳电极GCE直径为3mm。

3.如权利要求2所述的具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器,其特征是,类多肽结构的半胱氨酸-银配位聚合物Cys-Ag(I)CP的合成具体方法为:依次移取50.0~

80.0μL二次蒸馏水、5.0~30.0μL浓度为1.0~5.0mM的硝酸银AgNO3溶液及5.0~25.0μL浓度为1.0~4.0mM的L-半胱氨酸L-Cys溶液,搅拌器上剧烈搅拌2~5min至混合均匀,然后移至温度为25~37℃、转速调至150~200r/min的振荡器中孵育8~30min;最后移至4℃冰箱避光保存备用。

4.如权利要求3所述的具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器,其特征是,传感器的制备方法为:用移液器取1.0~4.0μL类多肽结构的半胱氨酸-银配位聚合物Cys-Ag(I)CP的溶液与2μL 0.05%wt Nafion溶液混合滴涂于石墨烯修饰电极GO/GCE上,15~

60min后,用二次蒸馏水缓缓冲洗电极,得到基于具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器CP/GO/GCE。

5.根据权利要求1~4任意一项所述的具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器在乙酰胆碱酯酶活性检测的应用,其特征是,乙酰胆碱酯酶活性检测的方法为:依次取

0.1~5.0μL浓度为1.0~3.0M的乙酰胆碱水溶液,0.1~5.0μL浓度为102~3×103U/L的乙酰胆碱酯酶,0.1~5.0μL浓度为1.0×102~4.0×103U/L的胆碱氧化酶ChOx及100.0~500.0μL的浓度为0.1M、pH7.0的PBS至总体积为500μL;搅拌器上剧烈搅拌1~3min至混合均匀,然后移至温度为30~37℃、转速调至150~200r/min的振荡器中孵育15~30min;合成一系列反应液,控制乙酰胆碱酯酶终浓度范围为:0~1.2U/L;利用所述的具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器CP/GO/GCE对反应液进行检测。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:利用计时电流法,设置电位为-0.3V,检测所述的具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器CP/GO/GCE在浓度为0.1M、pH7.0的PBS缓冲液中对乙酰胆碱酯酶的电化学响应,根据电流响应的大小确定与乙酰胆碱酯酶浓度的关系。

7.根据权利要求1~4任意一项所述的具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器CP/GO/GCE在乙酰胆碱酯酶抑制剂马拉硫磷的检测中的应用,其特征是,乙酰胆碱酯酶抑制剂马拉硫磷的检测的方法为:依次取0.1~5.0μL浓度为1.0~3.0M的乙酰胆碱水溶液,

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0.1~5.0μL浓度为10 ~3×10U/L的乙酰胆碱酯酶,0.5~10.0μL浓度为10~200nM的马拉硫磷,0.1~5.0μL浓度为1.0×102~4.0×103U/L的胆碱氧化酶ChOx及100.0~500.0μL的浓度为0.1M、pH7.0的PBS至总体积为500μL;搅拌器上剧烈搅拌1~3min至混合均匀,然后移至温度为30~37℃、转速调至150~200r/min的振荡器中孵育15~30min;合成一系列反应液,控制马拉硫磷的终浓度范围为:0~1.5nM;利用所述的具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器CP/GO/GCE对反应液进行检测。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于:利用计时电流法,设置电位为-0.3V,检测所述的具有电催化活性的多肽模拟物的电化学生物传感器CP/GO/GCE对乙酰胆碱酯酶抑制剂马拉硫磷的电化学响应,确定半抑制剂浓度IC50。