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专利号: 2017109651552
申请人: 吴小良
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-05-07
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,包括如下步骤:

A、选择抽出新叶数量较多的大叶紫金牛单株,从中选择叶龄9-10天的新叶,截取茎尖部位的幼嫩叶片,经消毒处理后,切成0.8-1.0cm的小段,获得无菌外植体;

B、将步骤A得到的无菌外植体接种到诱导培养基中,在培养温度24-26℃,光照强度

1500lux,光照时间10-12h/d的条件下培养25d,获到无菌试管苗;

C、将步骤B中得到的无菌试管苗切成1.0-2.0cm的小段,并接种到增殖培养基中,在培养温度24-26℃,光照强度1500lux,光照时间10-12h/d的条件下培养30d,获得不定芽,其中,所述增殖培养基是以MS为基本培养基,并添加30g/L蔗糖、3.5g/L琼脂、1g/L活性炭、

0.5-2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.3-0.5mg/L的灵发素和0.2-0.8mg/L的吲哚丁酸,pH值为

5.8;

D、将步骤C中得到的不定芽切成带顶芽或叶芽的茎段,并接种到生根培养基中,在培养温度24-26℃,光照强度1500lux,光照时间为10-12h/d的条件下培养30d,得到完整的带根苗,其中,所述生根培养基是以1/2MS为基本培养基,并添加30g/L蔗糖、3.5g/L琼脂、1g/L活性炭、0.1-1.0mg/L的多效唑、0.1-0.3mg/L的吲哚丁酸和1.0-2.0mg/L的萘乙酸,培养基pH值为5.8;

E、在室温为23-25℃的室内将步骤D得到的带根苗的瓶盖打开,并在瓶中加入少量炼苗液淹没所述生根培养基,炼苗3-5d后,用镊子将带根苗取出,洗净根部培养基,并移栽到育苗大棚内的育苗基质中继续培养40d,得大田移栽苗;

步骤B中,所述诱导培养基是以MS为基本培养基,并添加30g/L蔗糖、3.5g/L琼脂、

1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.4mg/L激动素和0.1mg/L的萘乙酸,pH值为5.8;

步骤E中,所述炼苗液的制备方法为:将6.0-8.0mg的纳米氧化锌加入1L的磁化水中,初混后,将其置于200的高斯磁场中磁化处理8h,即得。

2.如权利要求1所述的大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,步骤A中,所述消毒处理是将截取的茎尖部位的幼嫩叶片置于质量百分数为0.05%洗洁精水溶液浸泡5min,经流水冲洗15min,再移置于超净工作台上,用添加了2-3滴吐温-20的质量百分数为0.1%升汞消毒8-10min,然后用无菌水冲洗3-5次,并用无菌吸水纸吸干表面水分。

3.如权利要求1所述的大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,步骤C中,所述增殖培养基是以MS为基本培养基,并添加30g/L蔗糖、3.5g/L琼脂、1g/L活性炭、

1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.4mg/L的灵发素和0.8mg/L的吲哚丁酸,pH值为5.8。

4.如权利要求1所述的大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,步骤D中,所述生根培养基是以1/2MS为基本培养基,并添加30g/L蔗糖、3.5g/L琼脂、1g/L活性炭、

1.0mg/L的多效唑、0.3mg/L的吲哚丁酸和1.5mg/L的萘乙酸,培养基pH值为5.8。

5.如权利要求1所述的大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,步骤E中,所述育苗基质由泥炭土和细河沙按照重量比3:1混合制得;培养条件为:培养温度25-30℃,相对湿度为85-95%,遮光度60-75%。