1.一种倒地铃的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,包括下列步骤:
S1、外植体处理:取倒地铃种子作为外植体,先用羽衣草浸提液浸泡10~15min,然后用蒸馏水冲洗5~10min,再用质量分数为2%~5%次氯酸钠溶液浸泡10~15min,再用无菌水冲洗15~20min,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到处理后的外植体;
其中,所述羽衣草浸提液由以下重量份数组分制成:新鲜羽衣草50~60份、新鲜接骨木叶片10~15份、新鲜红兰花8~10份、乙醇10~15份以及无菌水300~500份;将上述重量份数的新鲜羽衣草、新鲜接骨木叶片、新鲜红兰花捣烂,然后加入上述重量份数的乙醇和无菌水,于30~50KHz频率下超声20~25min,超声温度控制在30~35℃,然后过滤除去滤渣,取滤液离心处理,再取上层清液,即制得所述羽衣草浸提液;
S2、外植体培养:将S1中处理后的外植体接种到MS外植体培养基中,在温度为25~28℃、光照强度为800~1000lux、光照时间为8~10h/天的条件下培养20~25天,外植体发芽后得到无菌试管苗;
其中,所述MS外植体培养基含有MS、0.3~0.6mg/L的细胞分裂素、0.3~0.5mg/L的L-硒甲基硒代半胱氨酸、0.1~0.2mg/L维生素C、0.2~0.3mg/L牛磺酸、38g/L蔗糖以及5.6g/L的琼脂,pH值控制在5.6~6.0;
S3、繁殖培养:将S2中得到的无菌试管苗剪切后置于MS繁殖培养基中,在温度为22~28℃、光照强度为1000~1200lux、光照时间为9~11h/天的条件下培养25~30天得到试管苗丛生芽;
其中,所述MS繁殖培养基中含有MS、0.4~0.8mg/L的细胞分裂素、0.4~0.6mg/L的L-硒甲基硒代半胱氨酸、0.2~0.3mg/L维生素C、0.3~0.4mg/L牛磺酸、35g/L蔗糖和5.8g/L的琼脂,pH值控制在5.6~6.0;
S4、壮苗培养:将S3中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在温度为25~30℃、光照强度为1200~1500lux,光照时间为10~12h/天的条件下培养20~25天,得到壮苗后的丛生芽;
其中,所述MS壮苗培养基含有MS、0.01~0.02mg/L的细胞生长素、0.5~0.8mg/L的L-硒甲基硒代半胱氨酸、1.5~2mg/L活性炭、3.5~4.5mg/L卡那霉素、30g/L蔗糖和6.2g/L的琼脂,pH值控制在5.6~6.0;
S5、生根培养:将S4中得到的壮苗后的丛生芽置于MS生根培养基中,在温度为20~30℃、光照强度为1300~1600lux、光照时间为12~14h/天的条件下培养25~35天,得到带根的完整植株;
其中,所述MS生根培养基含有MS、0.02~0.03mg/L的细胞生长素、0.6~1.0mg/L的L-硒甲基硒代半胱氨酸、2~2.5mg/L活性炭、4.5~5.5mg/L卡那霉素、28g/L蔗糖和6.4g/L的琼脂,pH值控制在5.6~6.0;
S6、炼苗与移栽:将S5中得到的带根的完整植株,在温度为18~25℃、自然通风的室内炼苗5~7天至植株表面角质形成后将苗取出,立即移栽到育苗基质中,在育苗基质继续生长25~35天后移栽到田地中;
其中,所述育苗基质包括以下重量份数的组分:腐熟锯末10~15份、腐熟蔗渣8~10份、腐熟菇渣5~8份、腐熟鸡粪4~6份、蚯蚓粪1~3份、黑土20~30份、珍珠岩5~8份、草炭5~8份、硝酸钙1~2份、硝酸镁0.5~0.8份、磷酸二氢钾1~2份以及菌肥0.2~0.5份。
2.如权利要求1所述的倒地铃的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,S2、S3中的细胞分裂素均为玉米素、N6-异戊烯基腺嘌呤、四氢吡喃苄基腺嘌呤中的任意一种。
3.如权利要求1所述的倒地铃的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,S4、S5中的细胞生长素均为萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、2-萘氧乙酸中的任意一种。
4.如权利要求1所述的倒地铃的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,S4中MS壮苗培养基中还添加有托玛琳石粉和远红外陶瓷粉,每升MS壮苗培养基中托玛琳石粉添加量为3.8~4.2g、远红外陶瓷粉添加量为2.8~3.4g;所述托玛琳石粉和远红外陶瓷粉在添加前需
100~120℃温度下烘烤30~40min,然后冷却至室温,再用质量分数为0.5%的高锰酸钾溶液浸泡1~1.5h,然后用无菌水冲洗5~10min后进行烘干处理,得到上述添加量的托玛琳石粉和远红外陶瓷粉。
5.如权利要求1所述的倒地铃的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,S6中珍珠岩粒径大小为2~4mm。
6.如权利要求1所述的倒地铃的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,S6中菌肥中包括有质量比为1.6:0.8:0.9:1.2的枯草芽孢杆菌、固氮菌、硅酸盐菌、木霉菌。