1.一种家蚕基因的分子克隆与鉴定方法，其特征在于，所述家蚕基因的序列为SEQ ID NO：1；命名为BmDHODH；

所述家蚕基因的分子克隆与鉴定方法包括以下步骤：步骤一，RNA提取，使用TRIZOL试剂提取总RNA；

步骤二，使用基于家蚕基因组，EST数据库，CDS数据库和Bombyx mori预测蛋白质数据库的生物信息学方法鉴定BmDHODH；

步骤三，根据SilkDB中预测的CDS和EST序列，设计引物，通过PCR获得BmDHODH的片段；

使用GeneRacerTM试剂盒与基因特异性引物进行3'和5'RNA连接酶介导的cDNA末端快速扩增以获得其全长cDNA；通过PCR证实所有的开放阅读框；所有PCR产物克隆到PMD19‑T简单载体中，并进行测序；

所述引物为：

BmDHODH‑qR T‑F GGCTTCAACAGCATAGGGCBmDHQDH‑qR T‑R CAGCCACATCCGAGAACTTTT步骤四，用ORF Finder软件确定BmDHODH在家蚕中的ORF；信号肽由SignalP4.0推测；使用SMART预测该域；使用ClustalX程序对BmDHODH的氨基酸序列进行比对，并使用MEGA 6.0程序通过邻接连接方法构建了BmDHODH的系统发生树，并用1000次引导重复；

步骤五，通过PCR扩增长度473、460和394bp的三个DNA片段；引物列于MEGAScriptTM RNAi试剂盒合成dsRNA，PCR产物作为模板；通过1％琼脂糖凝胶电泳产生三组dsRNA，采用分光光度法检测dsRNA的浓度；

所述引物为：

dsRNA#1dsRNA#1‑F GTAATACGACTCACTATAGGGAGAACAACTACAATGTCGCAGAAdsRNA#1‑R GTAATACGACTCACTATAGGGAGA TTCGTCGTGCCCTATGCTdsRNA#2dsRNA#2‑F GTAATACGACTCACTATAGGGAGA TCGACAAGCACGGAGACdsRNA#2‑R GTAATACGACTCACTATAGGGAGAAGCCAGTTTGAGGAGCAGdsRed dsRedF GTAATACGACTCACTATAGGGAGAATGG TGAGCAAGGGCGAdsRedR GTAATACGACTCACTATAGGGAGA TTACTTGTACAGCTCGTCCATG步骤六，6天孵育后，细胞从胚胎块移动，收集悬浮细胞，用补充有20％FBS的3ml Grace's培养基再培养；再培养6个月后，细胞成功分化培养；前5代传代培养的时间间隔为

30天，比例为1:2，然后变为10天，细胞以5天的间隔成功地传代培养60代；

步骤七，来氟米特以200mM储备溶液溶于二甲基亚砜，用来氟米特处理BmE‑SWU3细胞96小时；通过台盼蓝排除实验分析细胞存活；转染前一天，用新鲜培养基稀释细胞，并将2×5

10个细胞接种到24孔培养板中；使用TransMessengerTM转染试剂进行使用dsRNA的无血清转染；

步骤八，用(3‑(4,5‑二甲基噻唑‑2‑基)‑2,5‑二苯基)溴化四唑测定评价细胞增殖活3

性；将细胞以每孔8×10 细胞的密度接种到96孔板中，测量增殖率；用微板读数器在560nm处测量吸光度值；

步骤九，用10μM胸苷类似物5‑溴‑2‑脱氧尿苷处理2小时后，将细胞与针对BrdU的原代大鼠抗体孵育2小时，加入二抗加入1小时，加入300nM DAPI进行复染；将细胞安装在荧光安装介质中，并使用具有Image‑Pro Plus软件的尼康显微镜进行图像分析；

步骤十，当细胞达到80％汇合时进行细胞周期分析，细胞接种在6孔培养板中并用100μM来氟米特或DMSO处理；处理96h后，将细胞固定在70％乙醇中，用碘化丙啶染色；细胞通过FACScan仪器，并通过CellQuest分析软件分析数据；

步骤十一，用RIPA裂解缓冲液分离的蛋白质提取物用相应的凝胶浓度的SDS‑PAGE分级，抗BmDHODH抗体和抗微管蛋白抗体购自Beyotime；

步骤十二，使用TRIzol Reagent提取总RNA，将每个样品的2μg RNA反向转录，并扩增得到的cDNA；在94℃5分钟内进行RT‑PCR扩增；使用Quantitiy One软件计算BmDHODH和管家基因actin3 mRNA表达的值；

步骤十三，使用StepOnePlusTM实时PCR系统，用SYBR Premix Ex TaqTMII进行定量实时PCR；

步骤十四，统计分析，结果以平均值±S.D；通过双尾t检验确定实验组之间的差异。

2.如权利要求1所述的家蚕基因的分子克隆与鉴定方法，其特征在于，所述步骤一中使用无RNA酶的DNA酶I在37℃消化残留的基因组DNA 30分钟后，使用M‑MLV反向的20μL反应混合物中的2μg总RNA合成第一链cDNA转录酶，储存在‑20℃。

3.如权利要求1所述的家蚕基因的分子克隆与鉴定方法，其特征在于，所述步骤十二中RT‑PCR扩增，94℃30秒，55.5℃30秒，72℃1分钟，72℃延伸10分钟30个循环。

4.如权利要求1所述的家蚕基因的分子克隆与鉴定方法，其特征在于，所述步骤十三中PCR条件为95℃30秒，随后40个循环，95℃5秒，60℃30秒。