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专利号: 2017106313802
申请人: 湖南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1. 一株大肠杆菌抗肿瘤靶向工程菌株,其特征在于,该大肠杆菌抗肿瘤靶向工程菌株(Escherichia coliNissle 1917 (Tum-5) 保藏于中国典型培养物保藏中心,菌种保藏号为CCTCC NO:M 2017345。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌抗肿瘤靶向工程菌株,其特征在于,所述大肠杆菌抗肿瘤靶向工程菌株能可溶性表达和分泌性表达肿瘤抑素Tumstatin的抗肿瘤血管生成活性区域Tum-5,并能特异性地靶向肿瘤低氧区域。

3.一种如权利要求1所述的大肠杆菌抗肿瘤靶向工程菌株的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:(一)利用PCR拼接获得Tum-5基因

根据GenBank中登录的登记号为 AF258351.1的Homo sapiens 的Tumstatin蛋白的基因序列,查找出编码Tum-5蛋白所对应的核苷酸序列,设计2条以上的寡核苷酸链,便于进行PCR拼接以获得Tum-5基因;

(二)Tum-5诱导表达载体的构建及鉴定;

(三)Tum-5蛋白的诱导表达、纯化及鉴定;

(四)大肠杆菌抗肿瘤靶向工程菌株EcN (Tum-5)的构建;

(五)EcN在荷瘤小鼠体内的定殖情况分析;

(六)大肠杆菌抗肿瘤靶向工程菌株EcN (Tum-5)的抗肿瘤分析;

(七)细菌的安全性检测。

4.如权利要求3所述的大肠杆菌抗肿瘤靶向工程菌株的构建方法,其特征在于,步骤(四)中,所述构建的步骤为,将低氧启动子Pvhb、SUMO促溶标签、抗血管生成因子Tum-5,通过重叠PCR技术获得包含三段基因序列的PCR产物,再利用酶切连接的方法将该PCR产物连接到载体pET-28a,电击转化Escherichia coli Nissle 1917,即得到大肠杆菌抗肿瘤靶向工程菌株EcN (Tum-5 )。

5.如权利要求1或2所述的大肠杆菌抗肿瘤靶向工程菌株在制备靶向抗肿瘤药物中的应用。