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专利号: 2017105881485
申请人: 泗县微腾知识产权运营有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-10-09
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种南瓜游离小孢子诱导培养基,其特征在于:所述南瓜游离小孢子诱导培养基的配方如下:KNO3 80-90mg/L,MgSO4∙7H2O 140-160mg/L,KH2PO4 70-76mg/L,Ca(NO3)2∙4H2O 

160200mg/L,MnSO4∙4H2O 25-30mg/L,Na2-EDTA 11-14mg/L,FeSO4∙7H2O 12-15mg/L,H3BO3 

8.0-8.5mg/L,ZnSO4∙7H2O 8.5-9.5mg/L,KI 0.45-0.55mg/L,AgNO3 15-19mg/L,Na2MoO4∙ 

2H2O 0.2-0.3mg/L,CuSO4∙5H2O 0.02-0.03mg/L,CoCl2∙6H2O 0.02-0.03mg/L,腺嘌呤13-

17mg/L,L-谷氨酰胺450-550mg/L,维生素B1 0.9-1.1mg/L,维生素B6 0.6-0.8mg/L,Vc 

0.55-0.65mg/L,烟酸4.5-5.5mg/L,肌醇160-180mg/L,甘氨酸3.5-4.5mg/L,环鸟苷酸0.15-

0.25g/L,谷胱甘肽30-35mg/L,甲基亚硝基脲1.2-1.8g/L,蔗糖55-65g/L,植物凝胶 3.0-

3.5g/L,6-BA 0.15-0.25mg/L,NAA 0.3-0.4mg/L,甘露醇10-14g/L,聚乙二醇140-180mg/L,水解蛋白1.0-1.4g/L,植物硫化激动素PSK-α25-35pmol/L,pH5.4-5.8; 所述南瓜的品种是锦红一号和黄金二号。

2.一种采用权利要求1所述南瓜游离小孢子诱导培养基的南瓜游离小孢子诱导培养方法,其特征在于:将南瓜种子在春季3-4月份播于大田,待南瓜秧长至3-4米后进入初花期,选择单核晚期南瓜花蕾进行取材,置于4℃冰箱内低温预处理1-2d,接种前,将花蕾转移入超净工作台无菌烧杯中,倒入70%酒精进行表面消毒,浸泡1min后倒掉酒精,再加入0.1%氯化汞溶液浸泡消毒10min,然后用无菌水冲洗3次;沥干水分后,在B5培养基中用平头玻棒碾压花蕾,挤出小孢子;悬浮液经50μm无菌微孔纱布过滤,收集滤液于10ml离心管,850rpm下离心3min,沉淀物加5mL B5培养基,摇匀,850rpm下离心2min,重复两次,所得沉淀物即为南瓜游离小孢子;将南瓜游离小孢子转移入权利要求1所述的南瓜游离小孢子诱导培养基中,

33℃热激处理 48h后转入25℃暗培养直至胚性愈伤组织形成。

3.根据权利要求2所述的南瓜游离小孢子诱导培养方法,其特征在于:所述的单核晚期南瓜花蕾的选材标准为:测量花蕾的纵茎和横茎长度并计算纵横比,取材纵横茎之比为

2.4-2.6的南瓜花蕾。