1.米根霉(Rhizopus oryzae)LJH3,保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号:GDMCC No:60145,保藏日期2017年2月27日,地址:广东省广州市先烈中路100号大院59号楼
5楼;邮编:510075。
2.一种权利要求1所述米根霉LJH3在生物转化槐角苷制备染料木素中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用是将米根霉LJH3经发酵培养后获得的发酵液,或发酵液过滤除去菌体的滤液与蒸馏水等体积混合液作为生物催化剂,以槐角苷为底物构成转化体系,于30~38℃、200~250r/min恒温振荡条件下进行转化反应,转化反应结束后,将转化液分离纯化,获得染料木素;所述槐角苷是以溶解于0.1mol/L的NaOH水溶液的形式加入。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述生物催化剂用量以过滤前发酵液中干菌体重量计为4~5g/L转化体系;所述底物槐角苷的终浓度为0.01~1g/L转化体系。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述的转化反应条件为:在30~38℃、200~
250r/min恒温振荡条件下转化20~24h。
6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述发酵液按如下方法制备:将米根霉LJH3接种至发酵培养基,于28~30℃、200~250r/min恒温振荡条件下培养3~5d,获得发酵液;所述发酵培养基终浓度组成为:酵母浸出粉9~12g/L,蛋白胨5~7g/L,麦芽糖8~10g/L,NaCl
5g/L,MgSO4·7H2O 1g/L,溶剂为自来水,初始pH 5~7。
7.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述米根霉LJH3在发酵前,先经平板培养活化制备孢子,或经种子扩大培养制备种子液,然后用孢子或种子液接入发酵培养基进行产酶培养:(1)活化培养:将米根霉LJH3接种于PDA平板培养基,于28~30℃恒温培养2~3d,获得米根霉LJH3孢子;所述PDA平板培养基终浓度组成为:马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,琼脂
20g/L,溶剂为自来水,pH自然;
(2)种子扩大培养:挑取步骤(1)活化培养后米根霉LJH3孢子接种至种子培养基中,于
28~30℃、200~250r/min恒温振荡条件下培养2~3d,得种子液;所述种子培养基组成为:酵母浸出粉9~12g/L,蛋白胨5~7g/L,麦芽糖8~11g/L,NaCl 5g/L,MgSO4·7H2O 1g/L,溶剂为自来水,初始pH 5~7;
(3)发酵培养:用步骤(1)活化培养后米根霉LJH3孢子,或步骤(2)制备的种子液按体积浓度2~5%的接种量接入发酵培养基,于28~30℃、200~250r/min恒温振荡条件下培养3~5d,获得发酵液;所述发酵培养基终浓度组成为:酵母浸出粉9~12g/L,蛋白胨5~7g/L,麦芽糖8~11g/L,NaCl 5g/L,MgSO4·7H2O 1g/L,溶剂为自来水,初始pH 5~7。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述发酵培养基终浓度组成为:酵母浸出粉
12g/L,蛋白胨7g/L,麦芽糖11g/L,NaCl 5g/L,MgSO4·7H2O 1g/L,溶剂为自来水,pH 7。
9.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述分离纯化的方法为:在转化反应结束后,转化液用等体积的乙酸乙酯萃取1~3次,合并萃取液于45℃下减压蒸干乙酸乙酯后,加入原转化液体积1/4~1/5的甲醇溶解残留物;过滤,滤液于45℃下减压干燥,即得染料木素。