1.桔青霉(Penicillium citrinum)LB,保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号:
GDMCC No:60050,保藏日期2016年6月27日,地址:广东省广州市先烈中路100号大院59号楼
5楼;邮编:510075。
2.一种权利要求1所述桔青霉LB在生物转化连翘苷制备连翘脂素中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用是将桔青霉LB经发酵培养后获得的湿菌体为生物催化剂,以连翘苷为底物,以甲醇为助溶剂,以含湿菌体的发酵液或将湿菌体悬浮于缓冲液中构成转化体系,于30~35℃、200~250r/min恒温振荡条件下进行转化反应,转化反应结束后,将转化液分离纯化,获得连翘脂素。
4.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述转化体系中生物催化剂用量以湿菌体干重计为1.51~1.64g/L。
5.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述转化体系中,底物连翘苷的终浓度为1~
2g/L,所述助溶剂甲醇的体积终浓度为1%~5%。
6.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的转化反应条件为:在30~35℃、150~
250r/min恒温振荡条件下转化18~24h。
7.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述生物催化剂按如下方法制备:将桔青霉LB接种至发酵培养基,于28~30℃、200~250r/min恒温振荡条件下培养2~3天,获得发酵液,发酵液离心,收集湿菌体;所述发酵培养基终浓度组成为:蔗糖6~10g/L,(NH4)2SO4 4~7g/L,NaCl 5g/L,KH2PO4 5g/L,MgSO4 1g/L,MnSO4 0.5g/L,溶剂为水,pH 5~7。
8.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述桔青霉LB菌株在发酵前,通常需要先经平板培养基活化培养,再经过种子培养基扩大培养,然后用种子液接入发酵培养基进行培养,所述生物催化剂制备方法为:(1)活化培养:将桔青霉LB菌种孢子接种于平板培养基,于28~30℃恒温培养2~3天,获得平板孢子,所述的平板培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基,其终浓度组成为:马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,琼脂20g/L,溶剂为水,pH自然;(2)种子扩大培养:挑取步骤(1)活化培养后桔青霉LB孢子接种至种子培养基中,于28~30℃、200~250r/min恒温振荡条件下培养2~3天,得种子液;所述种子培养基,除不含琼脂外,其终浓度组成同平板培养基;(3)菌体发酵:将种子液以体积浓度5%~10%的接种量接种至发酵培养基中,于28~30℃、200~250r/min恒温振荡条件下培养2~3天,获得发酵液,将发酵液过滤,收集湿菌体;所述发酵培养基终浓度组成为:蔗糖6~10g/L,(NH4)2SO4 4~7g/L,NaCl 5g/L,KH2PO4 5g/L,MgSO4 1g/L,MnSO4 0.5g/L,溶剂为水,pH 5~7。
9.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述发酵培养基终浓度组成为:蔗糖7g/L,(NH4)2SO4 5g/L,NaCl 5g/L,KH2PO4 5g/L,MgSO4 1g/L,MnSO4 0.5g/L,溶剂为水,pH 6。
10.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述转化液分离纯化的方法为:生物转化反应结束后,转化体系用等体积的乙酸乙酯萃取,萃取液于圆底烧瓶中,45℃下减压蒸干乙酸乙酯后,再加入原转化体系体积1/4的甲醇溶解残留物;用滤纸过滤后,于45℃下减压干燥,即得连翘脂素。