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专利号: 2017101306253
申请人: 闽南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种浮游植物细胞内外活性氧的检测方法,其特征在于:包括如下步骤:

(1)取近海典型浮游植物于f/2培养基中进行培养,该f/2培养基中含有用以标记近海典型浮游植物的SA-CDs,获得SA-CDs标记培养液,具体培养条件如下:f/2培养基中含有14~16mg/L CDs,置于光照强度为130~150μmol photons(m2s)-1,光暗比为12~15h∶8~10h,温度为18~20℃生化培养箱中培养,以80~120rpm搅拌海藻悬浮液模拟海水流动,同时减少CDs在容器壁上吸附;

(2)以H2O2溶液作为活性氧标准液,根据上述SA-CDs在不同浓度的活性氧标准液的荧光

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强度变化的情况,获得第一线性工作曲线:y=0.2599x+2.404,其线性范围:6-9.6×10ng/L,其中x表示H2O2浓度,y表示荧光强度;根据上述SA-CDs在不同浓度的活性氧标准液的显色吸光度变化情况,获得第二线性工作曲线:y=-0.0002x+0.1941,其线性范围:3-2400ng/L,其中x表示H2O2浓度,y表示吸光强度;

(3)步骤(1)获得的SA-CDs标记培养液中的藻细胞悬浮于适量海水中,于17~19℃同时在高压汞灯持续照射下,以80~100rpm的速度持续搅拌0.8~1.2h,然后取适量进行超声波破碎,得破碎液,在破碎液中加入适量FeCl3溶液后于激发波长343nm,发射波长440nm下扫描其荧光光谱Slit 2.5/5,记录试剂空白和试液的荧光强度F0和F1,计算荧光强度变化值ΔF=F0-F1,最后将该荧光强度变化值ΔF作为y代入步骤(2)所得的第一线性工作曲线,所得x即为藻细胞内活性氧浓度检测结果;

(4)步骤(1)获得的SA-CDs标记培养液中的藻细胞悬浮于适量海水中,于17~19℃同时在高压汞灯持续照射下,以80~100rpm的速度持续搅拌0.8~1.2h,得细胞悬浮液,在该细胞悬浮液中加入适量FeCl3溶液后于波长λ525检测吸光强度,最后将该吸光强度作为y代入步骤(2)所得的第二线性工作曲线,所得x即为藻细胞外活性氧浓度检测结果。

2.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述近海典型浮游植物包括威氏海链藻CCMA-102和小球藻CCMA-410。

3.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述SA-CDs的制备方法如下:取1.0mL CDs储备液于100mL容量瓶中,再称取0.0138g水杨酸加入其中溶解后定容至刻度线,避光搅拌24h后置暗处2~8℃保存备用。

4.如权利要求3所述的检测方法,其特征在于:所述CDs储备液的中CDs的粒径为2-5nm,浓度为3g/L,量子产率量子产率≥60%,表面基团含氨基、羟基和羰基,其激发波长为

343nm,发射波长为440nm。

5.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述f/2培养基由浓度为75.0g/L硝酸钠母液、浓度为5.0g/L的磷酸钠母液、浓度为30.0g/L的硅酸钠母液、微量元素母液、维生素母液和海水组成,且硝酸钠母液、磷酸钠母液、硅酸钠母液、微量金属母液、维生素母液和海水的体积比为2∶2∶2∶2∶1∶2000,其中微量元素母液中含有氯化铁3.15g/L、硫酸铜9.8g/L、钼酸钠6.3g/L、硫酸锌22.0g/L、氯化钴10.0g/L、氯化锰180.0g/L,维生素母液含有维生素B12 

1.0g/L、生物素0.1g/L和盐酸硫胺0.2g/L。

6.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述FeCl3溶液的浓度为10mmol/L。