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专利号: 2017101280889
申请人: 广州润虹医药科技股份有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种iPS细胞分化为外胚层祖细胞的无血清诱导培养基,其特征在于,所述无血清诱导培养基是通过在每500ml DMEM/F12基础培养基中添加终浓度为5-10μM的吲哚美辛、体积百分比1%的谷氨酰胺、体积百分比1%的非必需氨基酸、5-20μM的SB431542、5-18ng/ml的EGF、0.05-0.2mmol/mlβ巯基乙醇、0.1-1μg/ml的氢化可的松、20-100μg/ml的胰岛素、50-

150μg/ml的转铁蛋白、4-15ng/ml的亚硒酸钠、0.05-0.1mg/ml的青霉素以及0.05-0.1mg/ml的链霉素制备得到。

2.如权利要求1所述的iPS细胞分化为外胚层祖细胞的无血清诱导培养基,其特征在于,所述无血清诱导培养基是通过在每500ml DMEM/F12基础培养基中添加终浓度为8-10μM的吲哚美辛、体积百分比1%的谷氨酰胺、体积百分比1%的非必需氨基酸、8-12μM的SB431542、10-15ng/ml的EGF、0.08-0.12mmol/mlβ巯基乙醇、0.1-0.5μg/ml的氢化可的松、

50-80μg/ml的胰岛素、80-120μg/ml的转铁蛋白、8-12ng/ml的亚硒酸钠、0.08-0.1mg/ml的青霉素以及0.08-0.1mg/ml的链霉素制备得到。

3.如权利要求2所述的iPS细胞分化为外胚层祖细胞的无血清诱导培养基,其特征在于,所述无血清诱导培养基是通过在每500ml DMEM/F12基础培养基中添加终浓度为8μM的吲哚美辛、体积百分比1%的谷氨酰胺、体积百分比1%的非必需氨基酸、10μM的SB431542、

12ng/ml的EGF、0.1mmol/mlβ巯基乙醇、0.4μg/ml的氢化可的松、60μg/ml的胰岛素、100μg/ml的转铁蛋白、10ng/ml的亚硒酸钠、0.1mg/ml的青霉素以及0.1mg/ml的链霉素制备得到。

4.一种iPS细胞分化为外胚层祖细胞的诱导方法,其特征在于,使用如权利要求1-3中任一项所述的无血清诱导培养基对iPS细胞进行诱导分化培养。

5.如权利要求4所述的iPS细胞分化为外胚层祖细胞的诱导方法,其特征在于,所述诱导分化培养的时间为7-10天。

6.如权利要求5所述的iPS细胞分化成外胚层祖细胞的诱导方法,其特征在于,还包括在诱导分化之前,将iPS细胞通过培养板和离心的方法形成单细胞团拟胚体的步骤。

7.如权利要求6所述的iPS细胞分化成外胚层祖细胞的诱导方法,其特征在于,所述将iPS细胞通过培养板和离心的方法形成单细胞团拟胚体的步骤是按照每个培养板孔加入

0.5-1×106个iPS细胞,添加EB形成培养基,再以400-700r/min低速离心4-10分钟后,放入

5%CO2、37℃环境中培养30-50小时,形成所述单细胞团拟胚体。

8.如权利要求7所述的iPS细胞分化成外胚层祖细胞的诱导方法,其特征在于,所述培养板为AggreWellTM800培养板。

9.如权利要求6-8中任一项所述的iPS细胞分化成外胚层祖细胞的诱导方法,其特征在于,还包括如下iPS细胞复苏及单细胞形成的步骤:将P30的iPS细胞进行复苏,用mTeSR1无基质细胞培养,在70-80%汇合度时,用Accutase消化液消化为单细胞,再将所述单细胞按6

照每个培养板孔1×10个iPS细胞加入所述培养板孔中以形成所述单细胞团拟胚体。