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专利号: 201611073219X
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法,其特征在于,利用螯合锌离子的介孔分子筛SBA-15为载体,以血管紧张素转化酶为固定对象,通过吸附与键和作用,得到SBA-15固定化血管紧张素转化酶。

2.根据权利要求1所述SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法,其特征在于,具体步骤为:S1、取孔径为6~7nm的介孔分子筛SBA-15通过直接或间接吸附螯合的方式制得螯合Zn2+的介孔分子筛SBA-15;

所述直接螯合的具体操作为:

将介孔分子筛SBA-15与浓度为0.05~0.06mol/L的ZnSO4水溶液按质量体积比1:10~20(g/mL)的比例混合,30~40℃水浴震荡45~65min,获得直接螯合Zn2+的SBA-15载体;

所述间接螯合的具体操作为:

将介孔分子筛SBA-15加入到无水乙醇中,向所述无水乙醇中加入3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷,20~30℃水浴震荡10~20h,反应结束后抽滤,收集固体物质,洗净;

所述介孔分子筛SBA-15与无水乙醇、3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷的质量体积比为1:350~400:20~30(g/mL/mL);

将所得固体物质与浓度为0.6~0.8mol/L的亚氨基二乙酸溶液按质量体积比1:10~20(g/mL)的比例混合,30~40℃水浴震荡反应60~90min,反应结束后抽滤,再次收集固体物质;

将再次收集的固体物质与浓度为0.05~0.06mol/L的ZnSO4溶液按质量体积比1:10~20(g/mL)的比例混合,30~40℃水浴震荡60~90min,获得间接螯合Zn2+的SBA-15载体;

S2、固定血管紧张素转化酶:将步骤S1制得的螯合Zn2+的介孔分子筛SBA-15与血管紧张素转化酶溶液按质量体积比1:5~20(g/mL)的比例混合,45℃~50℃,在水浴锅中水浴震荡

30~40min,至反应液中的蛋白含量不变,反应结束;抽滤、清洗、除去未吸附结合的血管紧张素转化酶,得到SBA-15固定化血管紧张素转化酶;

所述血管紧张素转化酶溶液以pH为7.8~9.3的硼酸盐缓冲溶液配置,浓度为10~

50mg/mL,酶活为0.1~0.2U/mL。

3.根据权利要求2所述SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法,其特征在于,步骤S1采用间接螯合的方法制备螯合Zn2+的介孔分子筛SBA-15。

4.根据权利要求2所述SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法,其特征在于,步骤S1所述介孔分子筛SBA-15的制备方法为:按质量体积比为1:50(g/mL)将聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物溶于浓度为1.4~1.6mol/L的盐酸溶液中,30~35℃水浴搅拌3~5h;然后逐滴加入正硅酸乙酯至与聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物的体积质量比为4~6:1(mL/g)的体积时终止,40~50℃水浴持续搅拌18~24h;随后将反应物转移至反应釜中,100~120℃静置条件下反应20~26h;收集固体产物,水洗抽滤干净后,70~90℃烘干10~14h,550℃焙烧6~10h,得到介孔分子筛SBA-15。

5.根据权利要求2所述SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法,其特征在于,步骤S2所述血管紧张素转化酶溶液采用粗提猪肺血管紧张素转化酶配置。