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专利号: 2016110723222
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种血管紧张素转化酶抑制肽的提取方法,其特征在于,具体步骤为:S1、取酶解液冻干粉,溶于pH为8.3、浓度为0.1mol/L的硼酸盐缓冲溶液中,制成浓度为

20~100g/L的酶解液溶液;

所述酶解液冻干粉为具有血管紧张素转化酶抑制活性的原料经蛋白酶水解制得的酶解液,经超滤分级、冻干制得;

所述硼酸盐缓冲溶液中含有浓度为0.1~0.3mol/L的NaCl;

S2、取固定化血管紧张素转化酶与步骤S1制得的酶解液溶液按质量体积比1:10~20(g/mL)的比例混合,30℃恒温水浴震荡50~120min,抽滤、采用pH为8.3的0.1mol/L硼酸盐缓冲溶液冲洗干净,收集固相,得到吸附有血管紧张素转化酶抑制肽的固定化血管紧张素转化酶;

S3、将步骤S3制得的吸附有血管紧张素转化酶抑制肽的固定化血管紧张素转化酶加入到pH为7、浓度为2mol/L的NaCl溶液中,30℃水浴30~120min,洗脱血管紧张素转化酶吸附的抑制肽,收集洗脱液,冻干,获得血管紧张素转化酶抑制肽。

2.根据权利要求1所述血管紧张素转化酶抑制肽的提取方法,其特征在于,步骤S1所述具有血管紧张素转化酶抑制活性的原料经蛋白酶水解制得的酶解液的具体制备过程为:取具有血管紧张素转化酶抑制活性的原料冻干制得冻干粉,将所述冻干粉与水按1:10~20(g/mL)的质量体积比混合,在45℃水浴中预热5~15min;

调节溶液pH至7.0,加入中性蛋白酶的加酶量为2500U/g后开始反应,反应过程中通过滴加标准碱溶液或标准酸溶液,维持反应液pH为7.0不变,水解2~3h后,沸水浴灭酶10~

20min,冷却;在4℃、10000rpm条件下,离心20~30min,取上清液,得到酶解液。

3.根据权利要求2所述血管紧张素转化酶抑制肽的提取方法,其特征在于,所述具有血管紧张素转化酶抑制活性的原料为水泡蛾螺。

4.根据权利要求1所述血管紧张素转化酶抑制肽的提取方法,其特征在于,步骤S2所述固定化血管紧张素转化酶为SBA-15固定化血管紧张素转化酶;具体制备方法为:取介孔分子筛SBA-15与血管紧张素转化酶溶液按质量体积比1:5~20(g/mL)的比例混合,45~50℃,在水浴锅中水浴震荡30~40min,至反应液中的蛋白含量不变,反应结束;抽滤、清洗、除去未吸附结合的血管紧张素转化酶,得到SBA-15固定化血管紧张素转化酶;

所述血管紧张素转化酶溶液采用7.8~9.3硼酸盐缓冲溶液配置,酶活为0.17U/mL。

5.根据权利要求4所述血管紧张素转化酶抑制肽的提取方法,其特征在于,所述介孔分子筛SBA-15为通过直接或间接吸附螯合的方式制得的螯合有Zn2+的SBA-15分子筛;

所述直接螯合的具体操作为:

将介孔分子筛SBA-15与浓度为0.05mol/L的ZnSO4水溶液按质量体积比1:10g/ml的比例

2+

混合,30~40℃水浴震荡45~65min,获得直接螯合Zn 的SBA-15分子筛;

所述间接螯合的具体操作为:

将介孔分子筛SBA-15加入到无水乙醇中,向所述无水乙醇中加入3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷,30℃水浴震荡10~20h,反应结束后抽滤,收集固体物质,洗净;

所述介孔分子筛SBA-15与无水乙醇、3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷的质量体积比为1:350~400:20~30(g/mL/mL);

连接亚氨基二乙酸,将所得固体物质与浓度为0.6~0.8mol/L的亚氨基二乙酸溶液按质量体积比1:10(g/ml)的比例混合,30~40℃水浴震荡反应,反应结束后抽滤,再次收集固体物质;

将再次收集的固体物质与浓度为0.05mol/L的ZnSO4溶液按质量体积比1:10(g/mL)的比例混合,30~40℃水浴震荡60~90min,获得间接螯合Zn2+的SBA-15分子筛。