1.一种重组载体，其特征在于，在穿梭质粒PHT01的KpnI和BamHI两个酶切位点之间插入通过重叠PCR技术连接优化了的启动子Psrf基因与优化了的启动子Pcry3Aa基因获得的双启动子Psrf-Pcry3Aa基因，在BamHI和AatII两个酶切位点之间插入由柔性连接肽连接得到的RDPE蛋白和海藻糖合成酶TreS的融合蛋白基因；

所述的优化了的启动子Psrf基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的优化了的启动子Pcry3Aa基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的RDPE蛋白基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述的海藻糖合成酶基因TreS基因核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.权利要求1所述重组质粒载体的制备方法，其特征在于，步骤如下：(i)以枯草芽孢杆菌subtilis168菌体的DNA为模板，进行PCR扩增，扩增得到启动子基因片段Psrf-1和Psrf-2，通过重叠PCR技术将两个片段连接起来得到优化的Psrf片段；

所述的PCR引物序列如下：

Psrf-1-F(上游引物)：

5'-GGTACC ATCGACAAAAATGTCATGAAAGAATCG-3'；

Psrf-1-R(下游引物)：

5'-A CGAAAAATGGGTGAAAAGTTTCATGCGGGATGCCGAAA-3'；

Psrf-2-F(上游引物)：

5'-AAACTTTTCACCCATTTTTCG AAAACATTTTTTTCATT GAACGGTAGA-3'；

Psrf-2-R(下游引物)：

5'-AAAAAAAGCACATTGTCATACCTCCCCTAATCT-3'；

(ii)提取苏云芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)LM79菌体的基因组，以基因组为模板，进行PCR扩增，得到优化了的Pcry3Aa启动子片段；

所述的PCR引物序列如下：

Pcry3Aa-F(上游引物)：5'-TTAGGGGAGGTATGACAATGTGCTTTTTTTG TTGAAGAATTATTAATGT TA-3'；

Pcry3Aa-R(下游引物)：5'-CGCGGATCCTTTTCTTCCTCCCTTTCTT-3'；

(iii)将步骤(i)制得的优化的Psrf基因片段和步骤(ii)制得的优化的Pcry3Aa基因片段通过重叠PCR技术连接，制得Psrf-Pcry3Aa基因片段；

(iv)将步骤(iii)制得的Psrf-Pcry3Aa片段连接到pTOPO-Blunt vector上，制得pTOPO-Blunt-Psrf-Pcry3Aa质粒载体；然后用限制性内切酶KpnI和BamHI对pTOPO-Blunt-Psrf-Pcry3Aa质粒载体和PHT01质粒进行双酶切，然后采用T4连接酶连接，制得重组质粒Psrf-Pcry3Aa-PHT01；

(v)以瘤胃球菌Ruminococcus sp.5_1_39BFAA的基因组为模板，进行PCR扩增，扩增得到RDPE蛋白基因片段；

所述的PCR引物序列如下：

RDPE-F:5'-CGCGGATCCATGAAATATGGTATTTATTACGCTTATT--3'；

RDPE-R:5'-T GACTTCAAATACATGTTTTA CAAA-3'；

(vi)以恶臭假单胞杆菌Pseudomonas putida KT2440的基因组为模板，经PCR扩增得到海藻糖合成酶基因片段TreS；

所述的PCR引物序列如下：

TreS-F(上游引物)：5’-TTGAAGTC ACCCAGCCCGACC-

3’

TreS-R(下游引物)：5’-CCCAAAGACGTCTCAAACATGCCCGCTGC-3’；

(vii)将步骤(v)制得的RDPE基因片段和步骤(vi)制得的TreS基因片段通过重叠PCR技术连接，制得RDPE-TreS基因片段；

(viii)将步骤(vi)制得的RDPE-TreS片段连接到pTOPO-Blunt vector上，制得pTOPO-Blunt-RDPE-TreS质粒载体；然后用限制性内切酶BamHI和AatII对pTOPO-Blunt-RDPE-TreS质粒载体和Psrf-Pcry3Aa-PHT01质粒进行双酶切，然后采用T4连接酶连接，制得重组质粒Psrf-Pcry3Aa-PHT01-RDPE-TreS。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(i)中，PCR扩增体系如下，总体系50μl：

2×Phanta Max Master Mix 25μl，浓度10μmol/L的上游引物2.5μl，浓度10μmol/L的下游引物2.5μl，模板2.5μl，用ddH2O补足50μl；

所述的PCR扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15sec，57℃退火15sec，72℃延伸15sec，30个循环；72℃延伸5min，-20℃保存。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(i)中，重叠PCR扩增体系如下，总体系50μl：初次扩增体系为25μl：

Psrf-1片段4μl；Psrf-2片段4μl；2×Phanta Max Master Mix 12.5μl；ddH2O 4.5μl；

初次扩增程序如下：

95℃预变性3min；94℃变性15sec，58℃退火15sec，72℃延伸15sec，5个循环，72℃延伸

2min；

补充扩增体系为25μl：

上游引物Psrf-1-F 2μl；下游引物Psrf-2-R 2μl；2×Phanta Max Master Mix 12.5μl；ddH2O8.5μl；

所述的重叠PCR的补充扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15sec，56℃退火15sec，72℃延伸15sec，30个循环；72℃延伸5min，-20℃保存。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(ii)中，PCR扩增体系如下：

2×Phanta Max Master Mix 25μl，浓度10μmol/L的上游引物2.5μl，浓度10μmol/L的下游引物2.5μl，模板2.5μl，ddH2O补足50μl；

所述的PCR扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15sec，51℃退火15sec，72℃延伸15sec，30个循环；72℃延伸5min，-20℃保存；

优选的，所述步骤(iii)中，重叠PCR扩增体系如下，总体系50μl：初次扩增体系为25μl：Psrf启动子片段4μl；Pcry3Aa启动子片段4μl；2×Phanta Max Master Mix 12.5μl；ddH2O 4.5μl；

初次扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15sec，60℃退火15sec，72℃延伸30sec，5个循环，72℃延伸

2min；

补充扩增体系为25μl：浓度10μmol/L的上游引物Psrf-1-F 2μl；浓度10μmol/L的下游引物Pcry3Aa-R 2μl；2×Phanta Max Master Mix 12.5μl；ddH2O 8.5μl；

所述的重叠PCR的补充扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15sec，58℃退火15sec，72℃延伸30sec，30个循环，72℃延伸5min，-20℃保存。

6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(v)中，所述的PCR扩增体系如下：

2×Phanta Max Master Mix 25μl，浓度10μmol/L的上游引物2.5μl，浓度10μmol/L的下游引物2.5μl，模板2.5μl，ddH2O补足50μl；

所述的PCR扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15sec，51℃退火15sec，72℃延伸15sec，30个循环；72℃延伸5min，-20℃保存；

优选的，所述步骤(v)中，PCR扩增体系如下，总体系50μl：

2×Phanta Max Master Mix 25μl，浓度10μmol/L的上游引物2.5μl，浓度10μmol/L的下游引物2.5μl，模板2.5μl，ddH2O补足50μl；

所述的PCR扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15sec，54℃退火25sec，72℃延伸15sec，30个循环；72℃延伸5min，-20℃保存。

7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(vii)中，重叠PCR扩增体系如下，总体系50μl：初次扩增体系为25μl：RDPE基因片段4μl；TreS基因片段4μl；2×Phanta Max Master Mix 12.5μl；ddH2O 4.5μl；

初次扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15sec，65℃退火15sec，72℃延伸30sec，5个循环，72℃延伸

2min；

补充扩增体系为25μl：浓度10μmol/L的上游引物RDPE-F 2μl；浓度10μmol/L的下游引物TreS-R 2μl；2×Phanta Max Master Mix 12.5μl；ddH2O 8.5μl；

所述的重叠PCR的补充扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15sec，63℃退火15sec，72℃延伸30sec，30个循环，72℃延伸5min，-20℃保存。

8.一种双启动子自诱导型重组枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，步骤如下：将上述重组质粒Psrf-Pcry3Aa-PHT01-RDPE-TreS电转化至枯草芽孢杆菌WB800n中，经筛选，制得双启动子自诱导型重组枯草芽孢杆菌；

进一步优选的，所述电转化的条件为：在1500V、5ms的电击条件下电击转化。

进一步优选的，所述筛选，为采用氯霉素筛选。

9.权利要求2所述构建方法制得的双启动子自诱导型重组枯草芽孢杆菌。

10.权利要求9所述双启动子自诱导型重组枯草芽孢杆菌在制备海藻糖合成酶中的应用。