1.一种重组载体，其特征在于，在PHT43质粒的BamHI酶切位点前通过连续三次重叠PCR方式将Pgrac启动子替换成α-淀粉酶启动子PamyQ，然后在BamHI酶切位点后插入麦芽寡糖基海藻糖合成酶-麦芽寡糖基海藻糖水解酶融合酶基因；

所述的α-淀粉酶启动子PamyQ核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，麦芽寡糖基海藻糖合成酶-麦芽寡糖基海藻糖水解酶融合酶核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；麦芽寡糖基海藻糖合成酶-麦芽寡糖基海藻糖水解酶融合酶氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1所述重组质粒载体的制备方法，其特征在于，步骤如下：(i)以穿梭质粒PHT43为模板，进行PCR扩增，得到PHT片段；

所述的PCR引物序列如下：

PHT-up:5’-ACTCAAACATCAAATCTTACAAA-3’PHT-down:5’-CTTTTCGTATGTGCGGGGCGTGATAAGATAAAAAATTTTTCACGCTTACATCAT-3’所述的PCR扩增体系为50μl：

2×Taq PCR MasterMix 25μl，10μmol/L 引 物 PHT-up 2.5μl，10μmol/L 引 物PHT-down 2.5μl，模板2.5μl，用ddH2O补足50μl；

所述的PCR扩增程序如下：

95℃预变性5min；95℃变性30sec，51℃退火30sec，72℃延伸40sec，30个循环；72℃延伸10min，-20℃保存；

(ii)提取B.amyloliquefaciens菌体的DNA，以DNA为模板，进行PCR扩增，得到PamyQ片段；

所述的PCR引物序列如下:

PamyQ-up:5’-TTTTATCTTATCACGCCCCGCACATACGAA-3’PamyQ-down:5’-TTCCTCCTTTAATTGGGAAGCACAAGTCTGAACGAAA-3’所述的PCR扩增体系为50μl：

2×Taq PCR MasterMix 25μl，10μmol/L引物PamyQ-up 2.5μl，10μmol/L引物PamyQ-down 2.5μl，模板2.5μl，用ddH2O补足50μl；

所述的PCR扩增程序如下：

95℃预变性5min；95℃变性30sec，63℃退火30sec，72℃延伸40sec，30个循环；72℃延伸10min，-20℃保存；

(iii)以穿梭质粒PHT43为模板，进行PCR扩增，得到SamyQ片段；

所述的PCR引物序列如下:

SamyQ-up:5’-GTGAGCGGATAACAATTCCCAATTAAAGGAGGAAGG-3’SamyQ-down:5’-GGATCCTACGGCTGATGTTTTTGT-3’所述的PCR扩增体系为50μl：

2×Taq PCR MasterMix 25μl，10μmol/L引物SamyQ-up 2.5μl，10μmol/L引物SamyQ-down 2.5μl，模板2.5μl，用ddH2O补足50μl；

所述的PCR扩增程序如下：

95℃预变性5min；95℃变性30sec，51℃退火30sec，72℃延伸40sec，30个循环；72℃延伸10min，-20℃保存；

(iv)将步骤(i)制得的PHT片段与步骤(ii)制得的PamyQ片段进行重叠PCR，制得PHT-PamyQ片段；

所述的重叠PCR的初次扩增体系为25μl：

PHT片段4μl；PamyQ片段4μl；2×Taq PCR MasterMix 12.5μl；ddH2O 4.5μl；

所述的重叠PCR的初次扩增程序如下：

95℃预变性5min；94℃变性30sec，63℃退火30sec，72℃延伸30sec，5个循环；72℃延伸2min；

所述的重叠PCR的补充扩增体系为25μl：

上 游 引 物PHT-up 2μl；下 游 引 物PamyQ-down 2μl；2×Taq PCR MasterMix

12.5μl；ddH2O 8.5μl；

所述的重叠PCR的补充扩增程序如下：

95℃预变性5min；94℃变性30sec，63℃退火30sec，72℃延伸30sec，30个循环；72℃延伸10min，-20℃保存；

(v)将步骤(ii)制得的PamyQ片段与步骤(iii)制得的SamyQ片段进行重叠PCR，制得PamyQ-SamyQ片段；

所述的重叠PCR的初次扩增体系为25μl：

PamyQ片段4μl；SamyQ片段4μl；2×Taq PCR MasterMix 12.5μl；ddH2O 4.5μl；

所述的重叠PCR的初次扩增程序如下：

95℃预变性5min；94℃变性30sec，51℃退火30sec，72℃延伸40sec，5个循环；72℃延伸2min；

所述的重叠PCR的补充扩增体系为25μl：

上游引物PamyQ-up 2μl；下游引物SamyQ-down 2μl；2×Taq PCR MasterMix

12.5μl；ddH2O 8.5μl；

所述的重叠PCR的补充扩增程序如下：

95℃预变性5min；94℃变性30sec，51℃退火30sec，72℃延伸40sec，30个循环；72℃延伸10min，-20℃保存；

(vi)将步骤(iv)制得的PHT-PamyQ片段与步骤(v)制得的PamyQ-SamyQ片段进行重叠PCR，制得PHT-PamyQ-SamyQ片段；

所述的重叠PCR的初次扩增体系为25μl：

PHT-PamyQ片段4μl；PamyQ-SamyQ片段4μl；2×Taq PCR MasterMix 12.5μl；ddH2O

4.5μl；

所述的重叠PCR的初次扩增程序如下：

95℃预变性5min；94℃变性30sec，51℃退火30sec，72℃延伸30sec，5个循环；72℃延伸2min；

所述的重叠PCR的补充扩增体系为25μl：

上 游 引 物PHT-up 2μl；下 游 引 物SamyQ-down 2μl；2×Taq PCR MasterMix

12.5μl；ddH2O 8.5μl；

所述的重叠PCR的补充扩增程序如下：

95℃预变性5min；94℃变性30sec，51℃退火30sec，72℃延伸1min，30个循环；72℃延伸10min，-20℃保存；

(vii)将 步 骤 (vi)制 得 的 PHT-PamyQ-SamyQ片 段 连 接 到 pTOPO-T vector上，制 得 pTOPO-T-PHT-PamyQ-SamyQ；然 后 用 限 制 性 内 切 酶 KpnI和 BamHI 对pTOPO-T-PHT-PamyQ-SamyQ和PHT43进行双酶切，然后采用T4连接酶连接，制得重组质粒PamyQ-PHT43；

(viii)以Arthrobacter nicotinovorans基因组DNA为模板，分别设计扩增麦芽寡糖基海藻糖合成酶TreY的引物F1和R1、扩增麦芽寡糖基海藻糖水解酶TreZ的引物F2和R2；

F1:5’-GGATCCGTGTTGACACCGAAATCGACCTACC-3’R15’-CCTCGGGGGTGAACGTGC-3’F2:5’-ATGAGTTCGCCATTCGAGGT-3’R2:5’-GACGTCGTCGAGCAGGTGGATGGAGG-3’以Arthrobacter nicotinovorans基因组为模板，F1和R1为引物，通过PCR过程获得产物TreY；

所述PCR体系为50μl：

2×HiFi-PCR master 25μl；上游引物F12.5μl；下游引物R12.5μl；模板2.5μl；

ddH2O 17.5μl；

所述PCR程序如下：

95℃变性5min；95℃变性30sec，54℃退火30sec，72℃延伸2.5min，共30个循环；72℃延伸10min，-20℃保存；

(ix)以Arthrobacter nicotinovorans基因组为模板，F2和R2为引物，通过PCR过程获得产物TreZ；

所述PCR体系为50μl：

2×HiFi-PCR master 25μl；上游引物F12.5μl；下游引物R12.5μl；模板2.5μl；

ddH2O 17.5μl；

所述PCR程序如下：

95℃变性5min；95℃变性30sec，56℃退火30sec，72℃延伸2min，共30个循环；72℃延伸10min，-20℃保存；

(x)将获得的产物1和产物2通过重叠PCR方法实现两基因间的拼接，得到产物TreY-TreZ；

所述的重叠PCR的初次扩增程序如下：

95℃预变性5min；94℃变性30sec，56℃退火30sec，72℃延伸2.5min，5个循环；

所述的重叠PCR的补充扩增体系为25μl：

上游引物F12μl；下游引物R22μl；2×Taq PCR MasterMix 12.5μl；ddH2O 8.5μl；

所述的重叠PCR的补充扩增程序如下：

95℃预变性5min；94℃变性30sec，51℃退火30sec，72℃延伸1min，30个循环；72℃延伸10min，-20℃保存；

(xi)将TreY-TreZ基 因 片段 连 接 至pZERO-Blunt载 体上，制 得重 组 质 粒pZERO-TreY-TreZ；用限制性内切酶BamHI和AatII对重组质粒pZERO-TreY-TreZ和步骤(vii)制得的重组质粒PamyQ-PHT43进行双酶切，用T4连接酶进行连接，制得重组质粒PamyQ-PHT43-TreY-TreZ。

3.一种淀粉诱导型重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，将权利要求1所述重组质粒PamyQ-PHT43-TreY-TreZ转化枯草芽孢杆菌获得。

4.如权利要求3所述的淀粉诱导型重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌WB800n。

5.权利要求3所述淀粉诱导型重组枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，步骤如下：将感受态细胞在2500V、25uF的条件下电击转化，氯霉素筛选，即得。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述氯霉素筛选步骤如下：在含有氯霉素抗生素的平板上进行白斑筛选，挑取白色单一斑点，接种到含有氯霉素的液体LB培养基，培养至对数末期，对能在含有氯霉素抗生素的LB培养基上生长的菌液进行PCR验证，将能够扩增出目的条带的转化子进行提取质粒，对提取的质粒进行酶切验证，含有目的条带的，即得；

含有氯霉素的液体LB培养基，每升组分如下：

10g蛋白胨、10g NaCl、5g酵母浸粉、5mg氯霉素。

7.权利要求3所述的淀粉诱导型重组枯草芽孢杆菌在制备海藻糖合成酶中的应用。