利索能及
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专利号: 2016102619532
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种改变脂肪酶催化活性的活性重塑方法,其特征在于,所述方法是对脂肪酶进行变性和复性处理,在变性或者复性的过程中添加膜环境复合物。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述膜环境复合物是来自华根霉菌体细胞的膜环境复合物。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述活性重塑方法,在变性或者复性时单独添加膜环境复合物,或者同时添加膜环境复合物和表面活性剂。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述活性重塑是指脂肪酶催化酯化反应的活性重塑。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述同时添加膜环境复合物和表面活性剂中的表面活性剂为以下任意一种或者两种以上:两性离子表面活性剂、非离子表面活性剂、CTAB阳离子表面活性剂。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述脂肪酶为外源表达的华根霉成熟肽脂肪酶(包括包涵体)、华根霉脂肪酶r27RCL、疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶Lipozyme TL 1M、洋葱假单胞菌脂肪酶62309或南极假丝酵母脂肪酶CALB。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述膜环境复合物的提取,是先从培养好的华根霉菌体上利用表面活性剂提取膜环境复合物及膜结合蛋白,然后通过吸附提取液中的表面活性剂使膜结合蛋白沉淀,经离心分离后所得上清液即为膜环境复合物。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述膜环境复合物的的提取,具体是:(1)利用华根霉菌体经丙酮洗涤制备丙酮粉;(2)将丙酮粉悬浮于磷酸缓冲液中,搅拌、离心、取沉淀、洗涤两次以上,然后将洗涤后的沉淀重新悬浮于含有0.05-0.15%Triton X-100的磷酸缓冲液中,搅拌、离心,将得到的沉淀悬浮于1-2%Triton X-100磷酸缓冲液中,振荡4-12小时、离心,得到的上清液为膜环境复合物及膜结合蛋白;(3)在提取液中加入吸附剂Bio-beads,振荡、离心,所得上清液即为膜环境复合物WTS。

9.根据权利要求1-8任一所述方法得到的活性重塑的脂肪酶。

10.权利要求9所述的脂肪酶在催化酯化反应方面的应用。