1.一种检测海洋多糖生物活性的方法,包括以下步骤:步骤1,将海洋多糖样品配制成多糖溶液;
步骤2,将RAW264.7巨噬细胞调整至细胞密度为105~106个/ml的溶液;
步骤3,利用步骤1的多糖溶液和步骤2得到的细胞液配置一系列混合液,使混合液的巨噬细胞的细胞密度相同,海洋多糖的浓度不同,该海洋多糖浓度在0~200μg/ml之间;然后进行巨噬细胞细胞培养;
步骤4,取步骤3得到的培养物收集细胞上清液;
步骤5,取步骤4得到的细胞上清液用电子自旋共振波谱法检测氮氧自由基NO·的浓度,检测值的高低说明被检测多糖样品的体外免疫调节活性高低,具体过程如下:
1)向细胞上清液中加入10mmol·L-1甲基葡萄糖胺二硫代氨基甲酸盐和2mmol·L-
1FeSO4的溶液作为NO·自由基捕获剂;
2)用石英毛细管吸取1)中混合液至适当高度,用凡士林封毛细管下口;
3)电子自旋共振波谱仪检测NO·自由基生成情况,得到检测值;电子自旋共振波谱仪检测具体参数如下:X-波段;调制频率100kHz;谐振频率9.4GHz;微波功率25mW;调制幅度
0.25mT;中心磁场356mT;扫描时间30s;扫描宽度10mT;时间常数0.1s;温度26℃。
2.根据权利要求1检测海洋多糖生物活性的方法,其特征在于,在步骤1中,利用达尔伯克改良伊格尔培养基配制多糖溶液。
3.根据权利要求1或2检测海洋多糖生物活性的方法,其特征在于,在步骤2中,利用达尔伯克改良伊格尔培养基调节细胞密度。
4.根据权利要求1检测海洋多糖生物活性的方法,其特征在于,步骤3中,进行所述RAW264.7巨噬细胞培养的条件为:置于37℃、CO2体积浓度为5%的二氧化碳培养箱内培养
48h。