1.一种马尾藻寡糖的制备方法,其特征在于:以马尾藻脱脂和除蛋白后的精多糖为原料,利用超声波处理,依次添加褐藻胶裂解酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、果胶酶酶解多糖后,沸水加热以灭酶活,经乙醇沉降法去除未降解充分多糖,离心上清液过分子筛后截留物,冷冻干燥制备得到马尾藻寡糖;
具体方法如下:
(1)将马尾藻干燥后粉碎,向马尾藻干粉中加入95%乙醇回流提取1-2小时,干粉重量与乙醇体积比为1:15-20,回流结束后除去乙醇,烘干得到干燥脱脂的马尾藻粉末;马尾藻粉末中加入蒸馏水,其中马尾藻质量与蒸馏水体积比为1:25-30,85-90℃下使用水提法提取
2-3小时,提取结束后,进行过滤,将滤渣重复上述水提步骤进行2-3次提取,将获得的滤液混合后进行浓缩,加入3-4倍体积95%乙醇,4-10℃静置沉淀8-12小时后,离心收集沉淀,真空冷冻干燥后得马尾藻粗多糖粉末;
(2)向步骤(1)所得马尾藻粗多糖粉末中加入蒸馏水,其中马尾藻粗多糖粉末质量与蒸馏水体积比为1:10-20,进行搅拌复溶,用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白5-8次;
(3)利用截留分子量8000-14000规格透析袋,去除有机小分子、色素;截留液在50-60℃及转速为20-40 r/min条件下旋转蒸发,浓缩至膏状,并进行真空冷冻干燥得到马尾藻精多糖粉末;
(4)将步骤(3)中所得马尾藻精多糖粉末用蒸馏水溶解,质量浓度为4-10%,调节pH为
6.5-8.0,加入褐藻胶裂解酶后进行辅助超声酶解15-20min,超声波功率为45-80kHz,然后置于25-32℃,速度为65-90r/min水浴摇床中进一步酶解1-1.5h后取出,沸水加热5-10 min以灭酶活,冷却至室温,离心取上清液备用;
(5)将步骤(4)离心所得上清液调节pH为5.0-7.0,加入甘露聚糖酶后进行辅助超声酶解10-15min,超声波功率为45-80kHz,然后置于50-60℃,速度为65-90r/min水浴摇床中进一步酶解30-60min后取出,沸水加热10-15 min以灭酶活,冷却至室温,离心取上清液备用;
(6)将步骤(5)离心所得上清液调节pH为4.5-6.5,加入木聚糖酶后进行辅助超声酶解
30-60min,超声波功率为45-80 kHz,然后置于50-60℃,速度为65-90r/min水浴摇床中进一步酶解30-60min后取出,沸水加热10-15 min以灭酶活,冷却至室温,离心取上清液备用;
(7)将步骤(6)离心所得上清液调节pH为3.0-6.0,加入果胶酶后进行辅助超声酶解10-
15min,超声波功率为45-80kHz,然后置于25-50℃,速度为65-90r/min水浴摇床中进一步酶解1-2h后取出,沸水加热5-10 min以灭酶活,冷却至室温,离心取上清液备用;
(8)向步骤(7)中酶解后离心所得上清液加入体积比1:3-4的95%乙醇沉降除去降解液中未降解多糖,4-10℃静置沉淀4-6小时后,离心收集上清,即为马尾藻寡糖粗品溶液;
(9)将步骤(8)中马尾藻寡糖粗品溶液通过2000D的分子筛,滤出液再通过200D的分子筛,将截留物冷冻干燥,制备得到马尾藻寡糖。
2.根据权利要求1所述的一种马尾藻寡糖的制备方法,其特征在于:所述褐藻胶裂解酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、果胶酶与步骤(4)中马尾藻多糖的质量比分别为1:60-85、1:25-
45、1:40-65和1:25-35。
3.如权利要求1所述制备方法制得的马尾藻寡糖在制备降血糖药物中的应用。