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专利号: 2015106797318
申请人: 闽南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种由双孢蘑菇罐头加工废水中提取纯化的活性多糖Abap1001,其特征在于:它的单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖以及葡萄糖,且阿拉伯糖、木糖、甘露糖以及葡萄糖的摩尔比为0.4:0.02:0.4:73.6。

2.一种由双孢蘑菇罐头加工废水中提取纯化的活性多糖Abap1002,其特征在于:它的单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖以及葡萄糖,且阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖的摩尔比为1.3:0.14:0.2:76.73。

3.一种活性多糖的提取纯化工艺,其特征在于:它包括以下工艺步骤:

(1)材料预处理:收集蘑菇罐头加工过程中产生的工业废水,然后对该工业废水进行旋转蒸发浓缩,浓缩至溶液折光率达到35~55%,得到蘑菇预煮浓缩液;量取一定量的蘑菇预煮浓缩液,在蘑菇预煮浓缩液中加入等体积的去离子水进行混合,混合后在65-75℃水浴条件下将蘑菇预煮浓缩液中析出的晶体完全溶解,溶解之后离心机离心,离心机的转速控制在11500-12500rpm之间,离心温度为15-25℃,离心时间为10-20min,离心之后取上清液,上清液用90-150KDa的超滤膜超滤,将超滤得到的截留液,按体积比为1:3.5-1:2.5的比例加入乙醇,在室温下醇沉过夜,醇沉得到的沉淀用50~100ml去离子水溶解,并于65-75℃减压蒸馏除去乙醇,再次离心机离心,离心机的转速控制在11500-12500rpm之间,离心温度为

15-25℃,离心时间为10-20min,收集上清液,即得到不小于100KDa的粗多糖Abcp,采用苯酚-硫酸法测Abcp的多糖含量,3.5-5℃保存备用;

(2)离子交换柱层析:

a.DEAE-52预处理:将DEAE-52进行酸、碱预处理;

b.经柱层析得粗多糖Abap100;

(3)Abap100的Sephadex G-200凝胶柱层析:

a.Sephadex G-200预处理;

b.经柱层析得活性多糖。

4.根据权利要求3所述的活性多糖的提取纯化工艺,其特征在于:步骤(2)中DEAE-52预处理的具体过程为:在DEAE-52中加入蒸馏水,浸泡过夜后抽滤,先用0.45-0.55mol/L的NaOH-NaCl碱洗,用蒸馏水洗至中性;用0.45-0.55mol/L的HCl酸洗,用蒸馏水洗至中性;用

0.45-0.55mol/L的NaOH-NaCl浸泡,最后用蒸馏水洗至中性即可。

5.根据权利要求3所述的活性多糖的提取纯化工艺,其特征在于:步骤(2)的b工艺具体为:将预处理后的DEAE-52进行沸水浴脱气,脱气时间为10-20min,脱气之后冷却装柱,用

0.015-0.025mol/L、pH为7.1-7.3的Tris-HCl缓冲液洗至分层明显,之后注入DEAE-Sephadex-A50,将层析柱连接到组合紫外检测仪和HW-2000色谱工作站,定时为5~20min/管,用0.015-0.025mol/L,pH为7.1-7.3Tris-HCl缓冲液洗平衡后上Abcp,待Abcp进入DEAE-

52的界面时,开始平衡洗脱,先用0.015-0.025mol/L,pH为7.1-7.3的Tris-HCl缓冲液洗脱平衡,收集主峰A的洗脱液;

当收集完主峰A的洗脱液之后,层析柱继续用0.1~0.5mol/L连续梯度溶度的NaCl溶液进行洗脱,控制流速为0.15-0.25mL/min,进行部分收集,每5~20min收集1管,每管的量是2~10mL,采用苯酚-硫酸法测偶数管多糖浓度,根据所测得数据,绘制成多糖含量分布图,再根据多糖含量分布图与洗脱谱图收集主峰B的洗脱液,合并主峰B的洗脱液,主峰B的洗脱液经4.5-5.5KDa超滤膜超滤脱盐,超滤得到的截留液进行离心机离心,离心机的转速控制在

11500-12500rpm之间,离心温度为15-25℃,离心时间为10-20min,收集上清液,即得酸性粗多糖Abap100。

6.根据权利要求3所述的活性多糖的提取纯化工艺,其特征在于:步骤(3)中所述Sephadex G-200预处理的具体工艺为:将Sephadex G-200干胶浸泡在蒸馏水中,不断搅拌,放置于室温下膨胀45-50h,并除去表面的碎片和沉降缓慢的细小颗粒,之后利用真空干燥器除尽凝胶液中的空气。

7.根据权利要求3所述的活性多糖的提取纯化工艺,其特征在于:步骤(3)的b工艺具体为:将预处理后的Sephadex G-200填入层析柱中,将层析柱连接到组合紫外检测仪和HW-

2000色谱工作站,用去离子水洗平衡,平衡后使液面降至填料界面时上样品Abap100,待样品完全进入填料界面时用0.015-0.025mol/L的NaCl溶液洗脱,控制流速为0.15-0.250mL/min,分部收集,每5~20min收集1管,每管的量是2~10mL,用苯酚-硫酸法测各管多糖浓度,根据所测得数据,绘制成多糖含量分布图,根据多糖含量分布图与洗脱谱图,收集主峰E的洗脱液,合并主峰E的洗脱液,对主峰E的洗脱液用4.5-5.5KDa超滤膜进行超滤到9-11mL,进行冷冻真空干燥后,得多糖纯品Abap1001。

8.根据权利要求3所述的活性多糖的提取纯化工艺,其特征在于:步骤(3) 的b工艺具体为:将预处理后的Sephadex G-200填入层析柱中,将层析柱连接到组合紫外检测仪和HW-

2000色谱工作站,用去离子水洗平衡,平衡后使液面降至填料界面时上样品Abap100,待样品完全进入填料界面时用0.015-0.025mol/L的NaCl溶液洗脱,控制流速为0.15-0.250mL/min,分部收集,每5~20min收集1管,每管的量是2~10mL,用苯酚-硫酸法测各管多糖浓度,根据所测得数据,绘制成多糖含量分布图,根据多糖含量分布图与洗脱谱图,收集主峰F的洗脱液,合并主峰F的洗脱液,对主峰F的洗脱液用4.5-5.5KDa超滤膜进行超滤到9-11mL,进行冷冻真空干燥后,得多糖纯品Abap1002。

9.根据权利要求3或5所述的活性多糖的提取纯化工艺,其特征在于:步骤(2)的b步骤中:所选用的层析柱为2.6cm×50cm层析柱,DEAE-52填料填的高度为柱高的2/5-3/5,填入DEAE-Sephadex-A50的高度为8-11cm,Abcp的上样量为5-10毫升。

10.根据权利要求3或7或8中的任意一项所述的活性多糖的提取纯化工艺,其特征在于:步骤(3)的b步骤中:所选用的层析柱为2.6cm×50cm层析柱,Sephadex G-200填入的高度为35-45cm,Abap100的上样量为5-10毫升。

11.根据权利要求1所述的活性多糖Abap1001的应用,其特征在于:在制备治疗急性肝损伤药物中的应用。

12.根据权利要求2所述的活性多糖Abap1002的应用,其特征在于:在制备治疗急性肝损伤药物中的应用。