1.一种利用木霉属真菌高产纤维素酶的方法,包括以下步骤:(1)无菌环境下将木霉属(Trichoderma)真菌的孢子接种于PDA平板培养基培养,然后挑取一环接种于种子培养基中,摇床振荡培养后得到种子液;
(2)按一定接种量将步骤(1)中获得的种子液接种到含乳糖的发酵产酶培养基中进行发酵培养;
(3)将含槐糖的新鲜碳源通过无菌操作加入到步骤(2)后的发酵体系中,继续发酵培养;
(4)发酵结束后,将步骤(3)后获得的发酵液进行离心分离,得到的上清液即为高产纤维素酶酶液。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,用作发酵菌株的木霉属真菌为绿色木霉(Trichoderma viride)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、康氏木霉(Trichoderma koningi)或拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,PDA平板培养基培养是指在28℃~32℃下培养96~120h。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,摇床振荡培养是指在
28℃~32℃、转速100~200r/min的摇床中培养24~72h。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述接种量为4%~
8%,所述发酵培养是指在温度为28℃~32℃、转速为100~200r/min的摇床中发酵60~
84h。
6.根据权利要求1~5中任一项所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述发酵产酶培养基包含以下质量份数的组分:硫酸铵 1~3份,
胰蛋白胨 0.2~0.6份,
吐温 -800.5~1.5份,
硫酸镁 0.2~0.4份,
硫酸锰 0.2~0.4份,
氯化钴 0.01~0.02份,
氯化钙 0.2~0.4份,
磷酸二氢钾 0.5~1.5份,
乳糖 2~6份,
辐照水稻秸秆粉 4~8份,
水 900~1200份。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述辐照水稻秸秆粉是采用下述方法制备得到:将干燥的水稻秸秆粉碎至30~50目,充氧密封包装,包装袋中氧气浓度≥21%,然后
60
用 Co-γ射线对其中的水稻秸秆进行辐照处理,处理剂量在20~200kGy,处理完成后得到辐照水稻秸秆粉。
8.根据权利要求1~5中任一项所述的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述新鲜碳源的制作过程包括:按质量比1~2∶1称取干甜叶菊渣和辐照水稻秸秆粉,加水后,90~120℃下保持
20~30min。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述辐照水稻秸秆粉是采用下述方法制备得到:将干燥的水稻秸秆粉碎至30~50目,充氧密封包装,包装袋中氧气浓度≥21%,然后
60
用 Co-γ射线对其中的水稻秸秆进行辐照处理,处理剂量在20~200kGy,处理完成后得到辐照水稻秸秆粉。
10.根据权利要求1~5中任一项所述的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,继续发酵培养的温度为28~32℃,时间为48~72h。