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专利号: 2015104564402
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2024-09-12
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种固定化芽胞漆酶,其特征在于,以废弃海绵为载体,通过共价结合作用将芽胞漆酶固定在海绵纤维表面。

2.根据权利要求1所述的固定化芽胞漆酶,其特征在于,所述废弃海绵为聚乙烯醇海绵。

3.根据权利要求1所述的固定化芽胞漆酶,其特征在于,所述芽胞漆酶是指芽胞杆菌属菌株所产的具漆酶活性的芽胞。

4.一种制备权利要求1-3任一所述固定化芽胞漆酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备芽胞杆菌属菌株所产的芽胞;

(2)海绵的预处理:将废弃海绵切割成2×2×2mm小块,95%乙醇浸泡过夜,反复洗涤,干燥至恒重;

(3)聚乙烯亚胺涂敷与芽胞固定化:将预处理好的海绵按10-50mg/ml浸于水中,用聚乙烯亚胺水溶液(0.1-2.0mg/ml)处理时间3-12h,然后用去离子水洗涤3次,收集聚乙烯亚胺涂敷好的海绵,自然干燥过夜;

(4)加入芽胞悬液使终浓度为1.0-10.0mg/ml(湿重),添加戊二醛交联剂(体积浓度为0.4-4%),并在4-40℃,pH 5.0-9.0缓冲液,50-250r/min条件下固定8-

24h;

(5)回收:芽胞与聚乙烯亚胺接枝的海绵经混合固定化处理后,过滤,用缓冲液冲洗

1-5次,分别收集上清液和固定化芽胞,保藏于0-40℃。

5.权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)也可以不经乙醇浸泡。

6.权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述聚乙烯亚胺水溶液终浓度为

1mg/ml,处理时间为6h。

7.权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)聚乙烯亚胺涂敷的海绵、芽胞以及戊二醛的含量分别为30mg/ml,5mg/ml(湿重)以及2%(体积浓度)。

8.权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)加入交联剂后,在37℃,0.1M柠檬酸磷酸盐缓冲液(pH 7.5),200r/min条件下固定12h。

9.权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)加入的交联剂也可以是碳二亚胺盐酸盐,其处理方法为,加入碳二亚胺盐酸盐使其终浓度为0.2-2.0mg/ml,并使用超声波振荡5-30min,使其充分散;加入芽胞悬液使终浓度为1.0-10.0mg/ml(湿重),再使用超声波处理10-60min,并在4-40℃,pH 5.0-9.0缓冲液,50-250r/min条件下固定

8-24h。

10.权利要求9所述的制备方法,其特征在于,碳二亚胺盐酸盐的终浓度为0.4mg/ml,前后两次超声波处理的时间分别为10min和30min。