1.一种基于足点域杂交的DNA测定新方法,其特征包括以下步骤:a.发卡DNA在使用之前在95℃温度下孵化2min,并逐步降至室温;
b.取10μL链霉亲和素修饰的磁珠至1.5mL的离心管中,用100μL pH 8.0的Tris-HCl缓冲溶液清洗两遍,然后将其分散到Tris-HCl缓冲溶液中;
c.在含10μL链霉亲和素修饰的磁珠的1.5mL的离心管中,加入10μL 1.0×10-5M的生物素修饰的DNA1,在37℃下振荡反应30min,并用100μL pH 6.8的磷酸缓冲溶液洗涤两遍,得到DNA1修饰磁珠,并分散到1mL的磷酸缓冲溶液中;
d.取c所得磁珠溶液100μL,并加入含有目标DNA的样品溶液100μL,然后再加入100μL含有1.0×10-7M DNA2的pH为6.8的磷酸缓冲溶液,并在37℃振荡反应1h;然后进行磁分离,除去上清液后,将磁珠用100μL pH 6.8的磷酸缓冲溶液洗涤两遍,并将其分散于100μL pH
6.8的磷酸缓冲溶液中;再加入200μL pH 11.3的鲁米诺溶液,打开光二极管,15秒后关闭光二极管,用化学发光仪检测化学发光信号,根据化学发光信号强度对目标物进行定量分析;
其中,DNA1、DNA2和目标DNA的序列如下:
DNA1:5’-biotin-GCGGTAGGCCGTCCTAATCTCCTCCCCCAACACGGCC-3’DNA2:5’-GTTGGGGGAGGAGATTAGGACGGCC-FITC-3’目标DNA:5’-AGATTAGGACGGCCTACCGC-3’。
2.根据权利要求1的测定DNA的方法,其特征在于所述的磁珠粒径为0.4-0.6μm,浓度为
8-12mg/mL。